细胞核酸纯化重组DNAPCR.PDF

2018/5/24 教育部高中生物科學資優生培育計畫-高雄區 DNA萃取純化與電泳分析 重組 DNA技術與基因選殖 聚合酶連鎖反應(Polymerase Chain Reaction, PCR) DNA定序(DNA sequencing) 基因定點突變(Site-directed mutagenesis)技術 DNA交互配對(雜交反應) (DNA hybridization) 授課教師：楊文仁 任職單位：高雄大學生命科學系 1 細菌質體 DNA DNA可分為兩大類： (1)染色體 DNA (chromosomal DNA) ；(2質體) DNA (plasmid DNA) ，質體存在於許多 細菌及酵母菌 等生物中。 質體是細菌染色體以外的遺傳物質 ，由雙股環狀 DNA 組成。質體上的基因 ，可以讓攜帶該質體的細菌具有 某些特性 例如對( 抗生素具有抗藥性) 。細菌所攜帶之 質體 DNA的大小及數目不一定 ，長度從數千鹼基對 (base pair, bp)至數十萬鹼基對都有 。 質體 DNA具有自行複製的能力 ，可以在細菌間互相轉 移 ，而將外來的基因轉移到接受者細菌細胞中表現。 在生物技術的應用方面 ，質體 DNA常被做為載體 (vector)用以選殖特定的 DNA以及表現特定的蛋白質。 因此 ，質體 DNA的製備是分子生物學的一項基本且重 要的技術 。 質體的名稱一般以 小寫英文字母p為字首 ，接上幾個 大寫英文字母用以描述該質體 ，在英文名稱添加數字 代表該質體被建構成功的 先後順序。例如 ：pBR322及 pBR325表示由Bolivar和Rodriguez 兩人所建構的質體； pUC 18及pUC 19表示經由University of California所研發 建構成功 。 2 1 2018/5/24 細菌的接合作用(conjugation)是細菌間傳遞遺傳物質的方法之一 ， 它必須由兩細菌建立菌體的連結 ，類似運輸孔道的功能 ，再把 DNA由一方傳送到對方菌體內 。 進行接合的兩細菌 ，兩者是不同的交配型(mating type) ，供體細胞 (donor cell)必須攜有質體 ，而受體細胞 (recipient cell)通常則不具 有質體 。在革蘭氏陰性菌中 ，質體 DNA帶有合成性纖毛(sex pilus) 的基因 ，性纖毛突出於供體細胞 表面 ，當它與受體細胞靠近時 ，能 拉近兩細胞的距離以便直接接觸。 大腸桿菌(E. coli的質體含有) 致育因子(fertility factor ，簡稱為 F factor) ，即 F質體 (F plasmid) ，是最先被發現可於細菌 接合作用時 被轉移的質體 。F質體可以獨立存在於細胞質中 ，也可以嵌入細菌 的染色體 ，長度約10萬個鹼基對 ，擁有自己的複製起始點 。擁有F + - 質體的供體細胞簡稱為 F 細胞 ；而受體細胞則稱為 F細胞 。 受體細胞因 接合作用可獲得原來沒有的能力 ，例如：對抗生素的 抗 藥性或是新的新陳代謝功能 ，使其能利用不同的營養來源或代謝物 。因此 ，對多數的有害細菌來說，接合作用更促進其族群的擴張 。