黄曲霉毒素B1间接竞争ELISA试剂盒的研制-生物工程专业论文.docxVIP

黄曲霉毒素B1间接竞争ELISA试剂盒的研制-生物工程专业论文.docx

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万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的 成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过 的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声 明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州 大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复 印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分 编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论 文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署 名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 摘要 摘要 摘 要 黄曲霉毒素 B1 是目前发现毒性最强、致癌性最高的化学物质之一,主要是 由黄曲霉和寄生曲霉寄生产生的的代谢产物,理化性质稳定,易于污染,在农产 品、蔬菜、加工食品、饲料等中常被检测出。黄曲霉入侵到食物链中,将产生对 应的黄曲霉毒素,人体或动物一旦食用将对机体产生巨大的危害。目前,世界各 国对农产品、食品、饲料等中黄曲霉毒素 B1 含量都有严格的限制。避免黄曲霉 毒素在食物链中的污染,不仅仅是在农产品原料方面的防控,在农产品材料贮藏、 食品加工、物流流通环节更要进行检测监督。 我国对黄曲霉毒素 B1 检测技术的研究工作进行了许多年,不同的技术手段 形成检测技术 30 余种,国际上权威的检测方法是利用高效液相法进行检测,我 国也执行此项检测法,但该方法成本较高、不利于操作,样品的前处理繁琐,检 测流程整体时间较长,不利于监测部门对市场的动态监督。间接竞争 ELISA 方 法是利用抗原抗体相互结合,酶标二抗加入后与底物反应显色以确定检测物含量 的实验技术,该实验技术转化为试剂盒产品将形成具有对样品的前处理要求低, 便于操作,而且能大大缩短检测时间的可推广化产品。 本项目研制的间接竞争 ELISA 试剂盒,通过条件的优化,确定了所需的包 被抗原最佳加入量为 50ng/孔,黄曲霉毒素 B1 单克隆抗体加入量为 100ng/孔,二 抗稀释比例为 1:500 最合适;所研制的间接竞争 ELISA 试剂盒检测结果较高效 液相法(HPLC)对比符合率大于 98%,检测结果与国际认可方法一致;试剂盒 的准确度研究采取了检测大米、玉米、花生中黄曲霉毒素 B1 的检测,结果显示 大米检测回收率为:85%-91%,玉米检测回收率为:84%-94%,花生检测回收率 为:88%-92%,回收率均符合国家标准回收率 70%-120%范围,说明了研制的试 剂盒检测结果的准确度高;试剂盒灵敏度研究,进行了对大米、玉米、花生的检 测限分析,结果显示出该试剂盒对大米的检出限为:0.25μg/kg,玉米的检出限为: 0.30μg/kg,花生的检出限为:0.30μg/kg,说明了该试剂盒的检测限灵敏且比国 I 家标准检出限更低更;试剂盒精密的研究,采取了监测大米的 ELISA 检测板, 结果显示板内差异 3.0,板间差异 2.9,说明研制的试剂盒批内与批间的差异不大, 检测方法稳定,检测结果不受研制试剂盒批次的影响。 关键词:黄曲霉毒素 B1、间接竞争 ELISA、方法学研究 II Abstract Abstract Abstract Aflatoxin B1 was found to be the most toxic and carcinogenic chemical substances, it is mainly caused by the metabolites of Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus together. Physical and chemical properties of aflatoxin B1 is stable and easy to contamination of agricultural products, food and feed. Aflatoxin invasion into the food chain, will produce the corresponding toxin. Human or animal consumption will have a great harm to the body. Currently, the world of agricultural products, food

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