慢性应激及邻苯二甲酸酯对睾丸Leydig细胞睾酮合成功能影响-麻醉学专业毕业论文.docxVIP

温州医学院博士学位论文中文摘要 温州医学院博士学位论文 中文摘要 慢性应激及邻苯二甲酸酯对睾丸Leyd i g细胞睾酮合成功能 影响 Leydig细胞作为雄性体内最主要的雄激素来源，其功能正受到了各种环境因 素的威胁。其中应激原和增塑剂已被证实可以显著抑制雄性体内睾酮水平，并进 一步影响雄性生殖系统发育与功能，但其中机制尚未完全清楚。本研究以成熟 Leydig细胞睾酮合成为中心，探讨慢性社会应激和塑化剂邻苯二甲酸酯对其影响 及分子机制。实验分为三个部分： (1)大鼠睾丸Leydig细胞再生过程中其特殊基因的鉴定：EDS处理法 成熟Leydig细胞(adult Leydig cell，ALC)是唯一能在睾丸中产生雄酮的内 分泌细胞，它仅占睾丸细胞的1-5％。成熟Leydig细胞可被EDS(ethane dimethane sulfonate)杀死而又能再生。本研究利用EDS处理后Leydig细胞再生过程模型， 检测了Leydig细胞的再生过程中睾丸mRNA表达谱。EDS处理后第7，21，35 及90天检测血清睾丸酮水平并检测相应时间点睾丸基因表达。EDS处理后第7 天，睾酮水平下降至无法检测的程度，然后逐渐开始恢复。此时，有81个基因 表达水平下调2倍或以上，其中48个降到无法检测。这些基因又逐渐开始恢复， 并在EDS处理后第90天恢复到正常水平。这些下调至无法检测的基因包括：Star， Scarbl，Cypllal，Cypl7al，胁刃bl，CypIbI和Cyp2al。同时，有89个基因 表达水平在第7天上调2倍或以上，其中包括Pkib。这些上调的基因表达水平在 EDS处理后第90天又恢复正常。Cyp2al直到EDS处理后第35天才开始恢复， 表明该基因可能仅在ALC而不在ALC的前体细胞表达。定量PCR或Westem 免疫印记验证了随机选取的部分基因或蛋白变化 (2)慢性社会应激对大鼠成熟Leydig细胞睾酮合成功能影响 把几只雄性和一只雌性大鼠混合饲养在可监测的洞穴系统(visible burrow system，VBS)中，可以建立该系统中劣势(subordinate)雄性大鼠社会应激模 型。据报道，劣势雄性大鼠与独立饲养的雄性大鼠相比，其血清皮质酮水平升高 而睾酮水平下降。而这种应激导致的劣势大鼠Leydig细胞功能下降的机制尚未 阐明。本实验比较了VBS中饲养的劣势雄性大鼠、优势(dominant)雄性大鼠 以及单独饲养的雄性大鼠，在饲养2天、7天和14天后，各自血清皮质酮、黄 6 温州医学院博士学位论文体生成素(1uteinizing 温州医学院博士学位论文 体生成素(1uteinizing hormone，LH)、睾酮水平和睾丸基因表达谱差异。结果发 现饲养7天和14天后，劣势雄性大鼠与其他两组大鼠相比，血清皮质醇水平显 著升高而睾酮水平显著降低。基因表达谱比较结果表明，Leydig细胞在应激7 天和14天后，功能较易受到抑制。睾丸中Leydig细胞特有基因，包括清道夫受 体bl(scavenger receptor class B type l，Scarbl)，P450胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side chain cleavage enzyme，Cypllal)和3D羟甾基类固醇脱氢酶l (3p-hydroxysteroid dehydrogenase l，Hsd3b1)表达水平在应激后显著下调。还 有一些与抗氧化应激相关的重要基因(如Cat，Gstml和Utgla6)和与线粒体脂 肪酸p氧化相关的基因(如Acaal，Decrl和Echsl)均也在应激后显著下调。 总的来说，慢性社会应激与劣势雄性大鼠皮质酮水平升高和Leydig细胞激素生 成功能下降密切相关。 (3)邻苯二甲酸酯对人和大鼠睾丸3p．HSD以及1713．HSD3活性的抑制作用 3p．羟甾基类固醇脱氢酶(313．HSD)和1713．羟甾基类固醇脱氢酶3 (1713．HSD3)参与Leydig细胞雄激素生物合成。采用人和大鼠睾丸微粒体观察 14种邻苯二甲酸酯对3B．HSD和1713．HSD3的抑制能力，这些邻苯二甲酸酯所含 的高分子醇结构中碳链的碳原子数目不同。结果显示，二丙基(DPrP)、二丁基 (DBP)、二戊基(DPP)、-(2．丁氧基乙基)(BBOP)和二环己基(DCHP)邻 苯二甲酸酯的对人3p．HSD活性抑制的半最大抑制浓度(IC50)分别为123．0，24．1， 25．5，50．3和25．50M，对大鼠3B．HSD活性抑制的IC50分别为62．7，30．3，33．8， 82．6和24．79M。然而，仅BBOP和DCHP强烈抑制人(ICso，23．3和8．29M) 和大鼠(ICso