马铃薯块茎蛋白质双向电泳技术体系建立及发育相关蛋白质的分析-植物学专业毕业论文.docxVIP

马铃薯块茎蛋白质双向电泳技术体系建立及发育相关蛋白质的分析摘 马铃薯块茎蛋白质双向电泳技术体系建立及发育相关蛋白质的分析 摘 要 蛋白质组学研究在功能基因组时代发挥着越来越重要的作用。双向电泳 (2．DE)技术是其关键技术之一，具有重复性好、极敏感和分辨率高等特点。 马铃薯(Solanum tuberosum L．)是世界上第四大粮食作物，对其块茎的发生发育 过程进行研究，了解其块茎发育的机理，将为马铃薯的栽培、育种和生产提供理 论依据。马铃薯块茎的发育是一个复杂而又有规律的过程，块茎蛋白质的数量、 种类、丰度等在不同发育阶段存在着一定的差异，而这些差异蛋白质又参与基因 的表达和块茎某些重要性状的调控。因此，对马铃薯块茎蛋白质组进行研究有助 于我们对块茎生长和发育机理的理解，也对马铃薯块茎产量及品质等性状的提高 具有一定的现实意义。 深入研究块茎蛋白质在发育过程中的差异表达，首先需要建立起马铃薯块茎 蛋白质的2．DE体系，而样品的制备则是2．DE的关键环节，直接影响2．DE的分辨 率和重复性。实验中，我们采用三氯乙酸／丙酮沉淀法，改良三氯乙酸／丙酮沉 淀法，酚提取法和两步沉淀四种方法提取马铃薯块茎蛋白质，进行2．DE分离， 对四种方法提取样品蛋白质的获得量、纯度及2，DE蛋白质图谱分辨率进行了比 较。结果表明：两步沉淀法提取块茎蛋白质的获得量和纯度较其它三种提取方法 高，2-DE蛋白质图谱较清晰、分辨率高。两步沉淀法提取马铃薯块茎蛋白质及 其2．DE电泳技术的建立，为研究马铃薯块茎蛋白质组学提供了技术支撑。 用两步沉淀法提取马铃薯块茎发育过程中四个阶段的蛋白质，即匍匐茎的诱 导和发生，匍匐茎的伸长，匍匐茎纵向生长的停止和块茎的发生及膨大阶段，并 进行双向电泳分析。结果表明：马铃薯块茎蛋白质主要集中在分子量在15．5 kD．87．2 kD范围，等电点范围在3．8．7．2区域内。(107．8 kD，pI 4．9)、(37．7 kD， pI 7．3)、(42．8 kD，pI 6．2)、(21．3 kD，pI 8．9)、(37．7 kD，pI 6．O)、(33．8 kD， pI 7．2)、．(23．7 kD，pI 5．1)和(77．3 kD，pI 6．4)八个蛋白质点只在第一发育阶 段特异表达，在随后的发育过程中不再出现：在匍匐茎的伸长阶段，新出现了十 三个蛋白质点，其中(25．2 kD，pI 8．6)、(26．3 kD，pl 7。7)和(30．4 kD，pI 6．1) 三个点在随后的发育过程又消失，另外三个蛋白质点(51．3 kD，pI 5．8)、(51．6 kD， pI 6．7)和(50．9 kD，pI 4．2)的丰度在该阶段明显下调；在匍匐茎纵向生长的停 甘肃农业大学2008届硕士学位论文 甘肃农业大学2008届硕士学位论文 摘要 止阶段，出现十个新蛋白质点，其中五个蛋白质点(45．1 kD，pI 6．8)、(45．3 kD， pI 4．8)、(44．3 kD，pI 6．1)、(44．7 kD，pI 5．2)和(42．9 kD，pI 7．3)只在该阶段 特异表达，在丰度明显上调的十四个蛋白质点中，(22．7 kD，pI 8．8)在该发育 阶段的丰度表现为最高，在块茎的发生及膨大阶段该蛋白质点的丰度又下调，另 有十七个蛋白质点的丰度明显下调，其中变化最明显的为(61．3 kD，pI 6．8)和 (58．5 kD，pI 6．4)两个点；在第四发育阶段即块茎开始膨大时有二十二个新蛋 白质点出现，且都分布在较低分子量(53 kD．23 kD)范围内，丰度明显上调和 下调的蛋白质点分别有十九和九个；Patatin蛋白在整个发育过程中其丰度明显增 加。在块茎的整个发育过程中，这些蛋白质可能是这些发育阶段特异表达的蛋白 质，它们的出现和消失可能与相应的发育阶段密切相关。 关键词：蛋白质提取，双向电泳，马铃薯块茎，发育阶段 n 马铃薯块茎蛋白质双向电泳技术体系建立及发育相关蛋白质的分析Summar 马铃薯块茎蛋白质双向电泳技术体系建立及发育相关蛋白质的分析 Summary Proteomics is playing all increasingly important role in the functional genomics era． Two·dimensional electrophoresis(2-DE)is one of the key techniques in proteomics s