基因扩增产物的固相杂交.pdf

第14卷 第2期 中 国 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 报 V o l14,N o 2 1998年4月 Ch inese Jou rnal of B iochem istry and M o lecu lar B io logy A p r. 1998　 基因扩增产物的固相杂交- 酶联显色方法的建立 王凤水　王　宇　陈红松　丛　旭 (北京医科大学人民医院肝病研究所, 北京 100044) 摘要　建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法. 将标记有生物素的寡核 苷酸引物所扩增的病毒基因产物, 与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速 杂交, 然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色, 读取光密度值. 应用本方法对 血清中乙型、丙型肝炎病毒核酸定量检测, 灵敏度分别可达15拷贝反应. 此方法简便、快速、 特异性好、敏感性高、半定量指标客观, 可广泛应用于肝炎病毒感染的临床诊断和疗效评价. 关键词: 核酸定量, 聚合酶链反应, 固相杂交, 酶联显色 Quan tif ica tion of Polym era se Cha in Reaction Products Using Solid Pha se Hybr id iza tion -Enzym e Color im etr ic D etection 　 　 　 W ang Feng Shu i W ang Yu Chen Hong Song Cong Xu ( , , , 100044) Institu te of H ep atology P eop le ’s H osp ital B eij ing M ed ical U niversity B eij ing Abstract 　A sim p le, rap id po lym erase chain reaction (PCR ) based on DNA quan tification techn ique w as estab lished. Fo r detecting specific viral nucleic acids, the p rim er labeled w ith b io tin w as u sed to am p lify viral gene fragm en t. T hen the 1st PCR p roduct w as com p lem en tly . , hyb ridized w ith the specific p robe covalen tly coup led on to m icrop late w ells F inally Strep ta . , vidin POD w as u sed in co lo rim etric detection W ith th is m ethod the sen sitivity of the detec tion system cou ld be 1—5 cop ies of hepatitis B genom e and hepatitis C genom e respectively. Sim p le, rap id w ith h igh specificity, sen sitivity and sem iquan tification, the m ethod de