马蔺子中天然化合物的分离鉴定及其活性研究-细胞生物学专业毕业论文.docxVIP

辽宁师范大学硕士学位论文}商 辽宁师范大学硕士学位论文 }商 要 马蔺子(the seeds ofIrispallasii Fisch．Var．chinensis Fisch．)，为鸢尾科植物马蔺的 种子，能够医治黄疸，泻痢，吐血，血崩，喉痹，痈肿等疾病，广泛应用于临床医学， 如“十六味马蔺子丸’’。马蔺子上述活性的物质基础尚不十分清楚。由于马蔺子中含有 大量黄酮类以及醌类化合物，而这些化合物具有广泛的生物学活性和一定的药用价值， 冈此认为黄酮类和醌类化合物可能是马蔺子发挥生物学作用的药理学基础，但是深入的 药理学机制仍需要进一步的研究。本研究目的是建立从马蔺子中系统分离化合物的方法 并发现新的化合物，也为深入揭示马蔺子的药物学作用以及马蔺子发挥抗癌作用的药理 学机制奠定了基础。 本实验采用95％7,醇回流提取法对马蔺子药材进行提取，得到的粗提物经三蒸水溶 解，得到水相和沉淀相。通过有机溶剂萃取法得到石油醚相、乙酸乙酯相和水相。硅胶 柱层析法通过梯度洗脱，分离石油醚相和乙酸乙酯相，得到200个石油醚相和321个乙 酸乙酯相(MLZl．MLZ521)流分，薄板层析法鉴定以及合并相似流分。制备型高效液 相色谱法对分离的硅胶流分进行纯化，最终得到5种化合物，其纯度经分析型高效液相 色谱测定，分别为98％，100％，100％，99％，99％。应用液质联用测定其分子量，结 合核磁共振法测定其碳谱和氢谱，确定5种化合物分别为表儿茶素，白藜芦醇二聚体， 白藜芦醇四聚体，2．甲氧基．6．十五烷基．1，4．苯醌，3．羟基马蔺子素。值得注意的是除了 3．羟基马蔺子素之外，其他4种化合物均首次从马蔺子中分离获得。 MTT法对上述5种化合物进行抗癌活性的筛选，发现白藜芦醇四聚体具有抗肝癌 HepG2细胞的活性。流式细胞仪检测白藜芦醇四聚体对HepG2细胞凋亡、线粒体膜电 位以及细胞内活性氧含量的变化。结果表明白藜芦醇四聚体对HepG2细胞增殖的抑制 作用呈现一定的浓度依赖性，相比于对照组，细胞内活性氧水平显著上升，线粒体膜电 位降低。因此，白藜芦醇四聚体可能是通过阻滞细胞G2／M期和提高细胞内活性氧的水 平促进细胞凋亡。 关键词：马蔺子；HepG2 cell s；活性化合物；抗癌作用；抗癌机制 辽宁师范大学硕士学位论文Identification 辽宁师范大学硕士学位论文 Identification and Study on the activity of natural compounds from the seeds of Iris pallasii Fisch．Var．chinensis Fisch． Abst ract Ma、in zi(MLZ)are seeds of jris pallasii Fisch．Var．chinensis Fisch．．MLZ 1S widely used in traditional Chinese medicine(TCM)for the treatment of such diseases as jaundice，secretary diarrh(o)ea，haematemesis，flooding，pharyngitis and carbuncle． MLZ iS the main constituent of the well known TCM formula“shiliu wei malinzi wan”．Because MLZ is rich in flavonoids and quinonoids that have extensive biological activities，it is generally regarded that these flavonoid and quinonoid compounds account for the SO many biological activites of MLZ．Precise molercular pharmacological basis of MLZ is still under investigated．Aim of the present study is to isolate chemical constituents from MLZ，which will not only optimize systemalic single compounds purification method，help US to find new compounds from MLZ， our study also provide chemical basis for further pharmacological study of the