毛白杨维管系统再生过程中的基因表达分析-林木遗传专业毕业论文.docx

摘 摘 要 木材形成是～个复杂的生物学过程，是维管形成层生长和分化出次生组织的结果。 植物的次生生长是高度有序的发育进程，涉及到维管形成层的活动样式及其所分化成的 次生木质部和韧皮部。为研究木材形成关键发育时期的分子生物学事件，我们以毛白杨 (Pop“lus tomentosa)为研究对象，利用大面积树皮环剥的方法建立能模拟自然的维管 形成层细胞发生和分化的维管再生实验系统，并结合扣除杂交技术、基因芯片方法分析 了维管再生过程中的差异基因表达谱。主要结果如下： 建立了毛白杨维管再生实验系统。愈伤形成层在剥皮后第10天开始发生t第14天 左右形成，第18天已观察到形成层细胞的分化，而第22天时已经分化出完整的木质部 和韧皮部。整个再生过程仅需3到4周的时间。因此，再生实验系统包括了这些关键的 发育转换期，将导致基因表达发生显著的变化。 利用抑制性扣除杂交技术建立了毛白杨形成层区域vs叶片组织的扣除eDNA文库， 并藉此制各了包含1，197个基因片段的eDNA芯片。然后与毛白杨剥皮后不同时期样品 进行杂交、比较分析，共得到227个在维管组织不同再生阶段差异表达的基因，测序后 与杨树基因组数据库和EST数据库检索分析，初步鉴定了差异表达基因的生物学功能。 在维管系统再生过程的形成层组织发生和发育期，差异表达基因包括钙调索、生长 素诱导蛋白、可能与维管系统发育相关的nodulin蛋白、一些具体功能未知的转录因子 和信号转导分子以及初生壁相关的细胞壁相关蛋白，如扩张蛋白、伸展蛋白、富羟脯氨 酸糖蛋白、羟甲基转移酶、富脯氨酸糖蛋白等。而在维管系统再生过程到了维管形成层 分化出木质部和韧皮部的关键时期，差异表达基因包括可能与形成层发育和分化相关的 MYB家族等转录因子、蛋白激酶等信号转导分子。 拟南芥在诱导的情况下也能进行一定程度的次生生长，能表达木本植物木材形成相 关的关键基因。利用拟南芥ATHl全基因芯片分析了毛白杨维管再生过程差异基因表达 谱。通过连续样品两两比较分析，得到了差异表达的149个基因，通过序列样品比较和 SOM聚类分析，得到了368个在整个维管系统再生过程中表达模式发生显著变化的基 1羽。 可能参与形成层发生、发育和分化以及木质部发育相关的基因，包括生长素诱导蛋 翻，蛋白激酶、G蛋白等信号转导相关蛋白，MYB、AP2、锌指结构域等转录因子等基 因丧达和调控因子的基因，也包括纤维素、果胶及其它细胞壁多糖生物合成相关基因以 肢扩张蛋白、伸展蛋白、富含羟脯氨酸糖蛋白等细胞壁蛋白基因。其分析结果与自制 eDNA芯片杂交分析结果有一定的相似性，说明了基因芯片跨物种杂交分析同样能够获 eDNA芯片杂交分析结果有一定的相似性，说明了基因芯片跨物种杂交分析同样能够获 得基因特异表达的信息。 本研究找到这些可能参与木材形成的相关基因，为利用拟南芥相应基因突变体分 析、单基因表达分析、以及转基因技术鉴定、分离到决定木材形成的重要基因或关键基 因奠定了基础，并为材性改良的基因工程育种提供理论基础及基因资源。 关键词：毛白杨，维管再生，木材形成，基因芯片．拟南芥 AbstractProfiles Abstract Profiles ofGenes Expressed During Regeneration ofthe Secondary Vascular System in Poplar (Populus tomentosa Cart．) WANG Minjie(Molecular Genetics ofTree) Directed by ZHANG ShougongLU Mengzhu Wood formation is a complex process composing many biological events，OCClLES as a result of growth and differentiation of the vascular cambium．This secondary growth is a hi啦ly ordered developmental process，which involves patterned division of vascular cambium cells and a subsequent regulated differiation of cambium derivatives into secondary xylem and phloem tissues．To access key developmental stages ofwood formation,we have established a regeneration system that can mimic the in