荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用.doc

文章编号: 100823499 (1999) 04200 文章编号: 100823499 (1999) 0420028204 α 荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用 刘清亮1Ξ 杨家祥1 张玉慧1 许兴友2 (11 中国科学技术大学 化学系, 安徽 合肥 230026) (21 淮海工学院 化学工程系, 江苏 连云港 222005) 摘 要 荧光光谱法是研究蛋白质在水溶液中分子构象的一种有效方法, 文章综述了常见的蛋白质 荧光光谱的研究方法和现象, 并介绍了几种荧光光谱新技术。 关键词 荧光光谱法; 蛋白质; 构象 中图分类号 O 657131 文献标识码 A 白质分子含有的黄素腺嘌呤二核苷酸 ( FA D ) 也能 发射荧光。 T rp、T y r 以及 P h e 由于其侧链生色基团的不 同而有不同的 荧 光 激 发 和 发 射 光 谱 ( 图 1)。 其 中 T rp 的荧光强度最大, T y r 次之, P h e 最小。 因为蛋 白质的荧光通常在 280 nm 或更长的波长被激发, P h e 在绝大多数实验条件下不被激发, 所以很少能 观察到 P h e 的发射。这样蛋白质的内源荧光主要来 自 T rp 和 T y r 残基。T rp 残基对微环境的变化很敏 感, 并 且 大 多 数 蛋 白 质 中 都 含 有 几 个 不 同 种 类 的 T rp 残基, 因而常作为内源荧光探针来研究溶液状 态下蛋白质的构象。 前言 0 蛋白质的研究方法很多, 可以概括为两大类: 一 类是测定溶液中的蛋白质分子构象。如核磁共振法, 圆二色谱法, 激光拉曼光谱法, 荧光光谱法, 紫外差 光谱法, 氢同位素交换法。另一类是测定晶体蛋白质 的分子结构。如 X 2射线衍射分析法和小角中子衍射 法。X 2射线衍射分析法虽然可以较准确地测量晶态 蛋白质分子的空间结构, 但有许多蛋白质不能培养 出单晶, 方法也很复杂, 而且生命体中的蛋白质多数 以溶液状态存在, 与晶体中的结构往往有一定的差 别。中子衍射法由于仪器昂贵等原因, 目前该方法应 用于蛋白质分子的构象研究才刚起步。 荧光光谱法 是研究蛋白质分子构象的一种有效方法。 它能提供 包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、 荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数, 这些参数从各 个角度反映了分子的成键和结构情况。 通过对这些 参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可 以推断蛋白质分子在各种环境下的构象变化, 从而 阐明蛋白质结构与功能之间的关系。同时, 荧光光谱 法还具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便 等优点。所以, 该方法在蛋白质分子构象研究中得到 越来越广泛的应用。 图 1 芳香酸的荧光发射光谱 F ig. 1 F luore scen ce em iss ion spec tra of the arom a t ic ac ids 蛋白质的荧光光谱 1 在蛋白质分子中, 能发射荧光的氨基酸有色氨 酸 (T rp )、酪氨酸 (T y r) 以及苯丙氨酸 (P h e)。个别蛋 除测定蛋白质分子的自身荧光, 即“内源荧光” α 收稿日期: 1999207202 Ξ 中国科学技术大学化学系教授、博士生导师 最常见的是 O 2 和 I- , 另外还有丙烯 最常见的是 O 2 和 I- , 另外还有丙烯酰胺 (A c r)、琥 珀 酰 亚 胺 (N B S )、H 2O 2、二 氯 乙 酰 胺、吡 啶 翁 (C 5H 5N H + )、半胱氨酸、氯化烃、N O 3 - 、IO 3 - 、C s+ 及 C u 2+ 等重金属离子。 其中碘离子 ( I- ) 可以淬灭蛋白 质表面的 T rp 残基的荧光, 而不能进入蛋白质分子 的内部淬灭荧光, 因此可以用来测定蛋白质分子表 外, 还可以利用荧光探针, 即“外源荧光”。荧光探针 又可分为稀土离子荧光探针如铕 ( ? )、铽 ( ? ) 和有 机荧光探针如 12苯 胺 基 萘282磺 酸 ( 1, 82A N S ) , 12 N , N 2二甲胺基萘252氯磺酸 ( 1, 52DN S2C l) (dan sy l ac id ) 和 22对甲胺萘262磺酸 (2, 62TN S) 等。 在已研究的大量蛋白质中, 许多是球蛋白。球蛋 白根据其荧光性质不同, 又可分为 A 类蛋白和 B 类 蛋白1 。A 类蛋白能发射 T y r 残基的特征荧光光谱, 且 T y r 残基荧光光谱的位置不受蛋白质构象变化 的影响。B 类蛋白, 由于其分子中从 T y r 残基到 T rp 残基之间发生了能量转移, 从而导致 T y r 残基的荧 光淬灭和 T rp