氯氰菊酯免疫毒性机制的初步研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

⑨ ⑨ 硕士学位论文 MASTER’S THESIS 中文摘要 拟除虫菊酯是有机磷、有机氯等化学合成杀虫剂的替代产品，目前被广泛使用。 而且大量被用于室内卫生杀虫，人类面临着拟除虫菊酯的暴露风险日益增大，因而 对其进行全面的安全性评价非常必要。以往的研究多集中在其神经毒性上，对其免 疫毒性关注较少。氯氰菊酯是拟除虫菊酯的代表，除了作杀虫用途以外还有其特点。 即在研究中，氯氰菊酯与免疫抑制药物环孢菌素A(CsA)和他可莫司(FK506)--,样， 可被用作钙调磷酸酶的特异性抑制剂。而钙调磷酸酶在免疫相关的多条信号通路激 活中发挥重要作用，因此选择氯氰菊酯作为研究对象，有可能较深入地揭示拟除虫 菊酯的免疫毒性机制。 因为鱼类是较低等的脊椎动物，在先天性免疫研究中有独特作用；而且鱼类较 其它动物对拟除虫菊酯更为敏感。而斑马鱼又是OECD标准化的评价外源化合物毒 性的实验动物，因此本研究中使用斑马鱼作为实验动物。 用氯氰菊酯对斑马鱼染毒，观察其急性毒性，确定氯氰菊酯半数致死浓度位于 10“玑～18 btg／L之．．间。使用相对定量RT．PCR方法研究氯氰菊酯96h染毒后，nfat信 号途径和wnt信号途径上相关分子的转录相对水平。并使用gsk38的激酶活性阻断剂 U+单独或与氯氰菊酯合并染毒，用同样方法研究其转录变化。 结果显示Li2C03溶于饲养水单独作用能抑制斑马鱼gsi3p的转录，与Li+作为 gsk3B激酶活性高效抑制剂的结果一致。氯氰菊酯单独染毒后，rcanl和讲邛转录都 有上调。而Li2C03与氯氰菊酯合并染毒上调iZ．邛转录的程度较二者单独作用高，在 一定程度显示加合效应。与预期不符的是，氯氰菊酯对协邛的转录上调。 因此氯氰菊酯的免疫调节效应可能不是通过其对CaN的抑制发生的，而更可能 与氯氰菊酯造成的细胞Ca2+浓度升高相关。而且Li2C03直接对斑马鱼染毒，也能 产生与对培养细胞作用一致的gsk3B[N．断作用。氯氰菊酯染毒也能显著诱导wntlOb 的转录。以上结果提示，氯氰菊酯对斑马鱼的免疫毒性机制中，可能通过Ca2+和gsk3B 等关键成员，整合nfat幂NWnt两种信号途径。 然而因为鱼类免疫相关蛋白的研究较少，大部分斑马鱼免疫相关蛋白和抗体还 未商品化；而且与高等脊椎动物的交叉反应性小，来源于常见实验动物的抗体和细 胞因子等不能在斑马鱼中使用，因而研究主要集中在转录水平。但是本研究仍然对 氯氰菊酯的免疫调节机制进行了初步研究：待条件成熟后有望对其进行深入研究。 关键词：氯氰菊酯；免疫调节；钙调磷酸酶 AbstractPyrethroid Abstract Pyrethroid pesticides are widely used as substitutes for orgnaophosphorus and organochlorine，especially for household sanitation purposes．Therefore，human beings are confronted with increasing pyrethroids exposure risk and，their toxicity assessment is essential．However，studies on pyrethroid pesticides toxicity generally focused on their neurological effects which underlied their major symptoms；while their immunological counterparts are usually ignored thus in-depth studies are more needed． Cypermethrin is a representative of the synthetic pyrethroids．Besides its pesticidal activity，cypermethrin has been sold and used as specific inhibitor of calcineurin’for decades with hundreds of papers approving this effect．Calcineurin has been implicated in several signaling pathways correlating with immune system，thus studies on immunological effects of cypermethrin might shed light on the me