棉铃虫细胞HzAm1的低血清培养优化研究-化学工艺专业毕业论文.docxVIP

㈣Y ㈣Y ¨iii●lI 删8 ㈣0Ⅲ9 ㈣8 5Ⅲ2 A Thesis Submitted in Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Engineering Optimized Cultivation of Helicoverpa armigera Cells HzAml in Low Serum Medium Maj or ：Chemical Process Candidate：Chen Yan Supervisor：Professor Zhang Youhong Wuhan Institute of Technology Wuhan，Hubei 430074，P．R．China May，2007 4 .._ 摘 摘 要 摘要 昆虫细胞一杆状病毒表达体系给真核生物重组医用蛋白和生物杀虫 ，、 剂的工业化生产带来了希望。为了提高杆状病毒在昆虫细胞中的复制量 或重组蛋白在昆虫细胞中的表达量，传统的方法是在昆虫细胞培养基中 ◆ 添加10％左右的胎牛血清。由于血清成本高、来源少，而且血清成份复 -～ 杂，还是支原体和其它异源病毒污染的重要来源，给基因工程表达的重 组蛋白的下游分离处理发展带来了困难，因此，用这一体系进行大规模 的商业化生产还存在着一定的挑战。 本课题从三种商业化的培养基TC．100、IPL．41以及Grace’s中筛选 出最适合棉铃虫细胞HzAml生长的基础培养基TC．100，然后以该培养 基为基础，补加一定量的水解乳蛋白以及酵母提取物等，可以将血清用 量从常用的10％降至1％，进行棉铃虫细胞HzAml低血清培养的研究。 在此基础上，通过将较为廉价的Grace’S培养基中加入一些如酵母提取物、 水解乳蛋白、脂类复合物、氢化可的松、氨基酸以及锌、钼、锰微量元 素，对Grace’s培养基进行改善，在血清为5％的条件下，用于培养棉铃 虫细胞HzAml，能达到比在血清浓度为10％的培养基TC．100中培养的 更为理想的效果，其最大细胞浓度比TC．100提高了70．2％，比在血清浓 度为10％的未改善的Grace’s中培养的细胞浓度提高了229％。同时，实 验中将从蛋黄中提取的脂配制成脂类复合物取代进口的脂类复合物，对 棉铃虫细胞HzAml在血清浓度为5％的条件下进行了培养，得到了较为 满意的结果，并且最大细胞浓度比Grace’S提高了319．7％。 关键词：棉铃虫细胞胎牛血清昆虫细胞培养基细胞培养 武汉工程大学硕士学位论文 .，. 4 飞 飞 f f 11 AbstractHopes Abstract Hopes for the production of eukaryotical recombinant proteins and bio·-pesticides on industrial scale emerge from insect cell··baculovirus expression system．In order to increase the quantities of baculoviruses or recombinant proteins expressed in insect cells，1 0％fetal bovine serum 女 (FBS)is traditionally supplemented to medium．However,due to the high ■■ ～ cost，less source and complicated components of FBS，which probably contaminates mycoplasma and other heterologous viruses resulting in the difficulties of the separation of the downstream genetic products，there are challenges when insect cells—baculoviruses system is applied to commercial manufacture on large scale． In gent leea吐media for the growth of Helicoverpa armigera cells (Uzhml)from three kinds of commercial media TC一100，Grace and IPL广41 with 10％serum were investigated and screened．The result shows t