棉花逆境响应相关NAC类转录因子的克隆与分析-遗传学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 The Clone and Analysis of Stress Response Related NAC Transcription Factors in Cotton A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Natural Science By Zhao can (Botanical Molecular Genetics) Dissertation Supervisor: Associate Professor. Zhu Xin-xia Professor. Liu Ren-zhong June, 2015 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果.据我所知，除 文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果.对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意. 研究生签名: 各队 时间: 二01$ 年 4 月 10 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版.有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅. 有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务 .有权将学位论文的标题和摘要汇编 νμ出版.保密的学位论文在解密后适用本规定. νμ 研究生签名: 导附: 料价  时间: 之e r5年 6 月 10 日 时间: 叫年 j 月 (0 日 . 摘 要 干旱、盐、病害等逆境胁迫严重影响着植物正常的生长发育，进而制约着作物产量。植物在漫 长的进化过程中，通过感知逆境信号，调控抵御逆境的相关基因表达变化，形成了诸多在逆境胁迫 下的保护机制。NAC 转录因子为植物所特有，目前对拟南芥、水稻等植物 NAC 基因的研究表明， NAC 基因在植物生长发育，器官形成，植株衰老，激素信号传导及逆境胁迫应答中发挥着重要作用。 目的：在亚洲棉全基因组中预测分析 NAC 基因，进一步开发棉花 NAC 基因资源；克隆获得陆地棉 NAC 转录因子，研究其在干旱、盐、病害等逆境胁迫下的表达，分析其转录活性，为揭示棉花 NAC 转录因子在响应逆境胁迫中的作用奠定基础 方法：利用生物信息学方法预测亚洲棉全基因组的 NAC 基因；采用 RT-PCR 方法克隆 GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因；采用实时荧光定量 PCR 技术分析基因在干旱、盐、病害等逆境胁迫下的表达；通 过构建酵母转录激活载体和亚细胞定位载体分析基因的转录因子活性； 采用基因工程方法构建 GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因的植物表达载体；通过农杆菌介导法转化烟草。 结果：在亚洲棉全基因组中预测了 138 个 NAC 基因，根据 GaNAC 蛋白的序列相似性及系统进化分 析，将其分为 11 个亚家族，每个亚家族的 GaNAC 蛋白数目为 4-25 个。基因结构分析发现，63.7% 的 GaNAC 基因含有 2 个内含子。GhSNAC5 基因的 cDNA 序列长度为 1080bp，其开放阅读框（ORF） 编码 299 个氨基酸。GhSNAC8 基因的 cDNA 序列长度为 1104bp，其开放阅读框（ORF）编码 349 个氨基酸。2 个基因所编码的蛋白序列在 N-末端均含有 NAM 保守域。对基因结构分析发现 GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因分别各含有 3 个外显子 2 个内含子，且内含子具有典型的植物内含子特征。利用荧 光实时定量 PCR 分析了 GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因受高盐、干旱及黄萎病胁迫处理后的表达变化。 结果显示，GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因在受到干旱处理 2h 后，表达明显上调，24h 后呈现下降态势； GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因在受到高盐处理 2h 后，表达量明显上调。GhSNAC5 基因在高盐胁迫 12h 后，相对表达量上调了 50 倍，这说明 GhSNAC5 基因在响应盐胁迫时，具有高表达性。GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因在受到黄萎病 VD8 处理 6h 后，相对表达量明显上升，比受干旱及盐处理的响应时 间要延后。通过构建酵母转录激活载体对 GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因的转录激活活性进行了试验， 缺失培养生长情况及 β-gal 显色结果显示，GhSNAC5 和 GhSNAC8 基因均能转录激活下游基因的表达。 利用 pBI2