玫瑰MYB基因的克隆及超量表达载体的构建-园林植物与观赏园艺专业毕业论文.docxVIP

川IIIII 川IIIII II IIII II IIII II r11]llf }Y2004369 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学饨论文 是否保密 豸 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方夕卜，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 面使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一网工作的同志对本研究所徽的任 何贡献均巴在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 研究生签名：奏囊踅 时阁： 2．4ft年 6月‘f7日 学位论文使用授权书 文)在解密后适用于本授权书．学位论文作槲：森荛免导臌一M 鉴绷辄≯『l“叫日．戤嗍：训年多吵日 注：请将本袭赢接装订在学位论文的扉页和目录之问 玫瑰MYB基因的克隆及超量表达载体的构建目录 玫瑰MYB基因的克隆及超量表达载体的构建 目录 摘要 ．．： ．．1 ABSTR ACT j ．．3 缩略词表 ．5 第一章绪论 ： 7 1．1玫瑰简介 。 ．7 1．2转录因子概述 7 ．1．3 MYB类转录因子的结构特征与分类 ．．．． 8 1．4 MYB类转录因子的功能及研究进展 ．10 1．4．1调节植物次生代谢 二 。10 1．4．2调节植物细胞形态和模式建成 12 1．4．3参与植物对环境胁迫的应答 ．13 1．4．4参与植物对激素的应答 13 1．5研究目的及意义 。 14 第二章玫瑰MYB基因的克隆与分析 ．： 15 2；l前言 ．： ．15 2．2材料 ．1 5 2．2．1植物材料 ．．15 2．2．2实验试剂 。’16 2．2．3载体和菌株 一16 2．2．4实验仪器 。 ．16 2．3实验方法 ．1 7 2．3．1玫瑰花瓣转录组测序 。17 2．3．2玫瑰花瓣高质量RNA的提取及纯化 ： ．j 。17 2．3．3玫瑰花瓣RNA反转录 ．．． ．1 8 2．3．4玫瑰基因组DNA的提取 。 ．19 2．3．5玫瑰MYB基因gDNA片段的扩增 。20 2．3．6用TAIL-PCR扩增gDNA片段两端的未知序列 22 2．3．7玫瑰MYB基因gDNA全长和cDNA全长的扩增 。： 24 2．4结果与分析 ．．24 2．4．1玫瑰花瓣总RNA的检测 _ 24 2．4．2 TAIL．PCR产物检测 ．25 2．4．3玫瑰MYB基因序列分析 26 2．4．4玫瑰MYB基因功能预测 27 华中农业大学201 华中农业大学201 1届硕士研究生学位论文 2．5讨论 一3 l 2．5．1玫瑰花瓣总RNA的提取 3 1 -2．5．2关于TAIL．PCR j 。3 l 2．5．3植物MYB基因的进化 32 第三章玫瑰MYB基因超量表达载体的构建 34 3．1前言 ．．： ．34 3．2材料 ．．34 3．2．1菌株、质粒、酶、试剂 34 3．2．2主要实验试剂的配置 函 34 3．2．3实验仪器 35 3．2．4实验所用引物序列 ．36 3．3实验方法 36 3．3．1目的基因插入片段的获得 36 3．3．2摇菌 ．： 37 3．3．3质粒DNA的提取 37 3．3．4双酶切及产物回收 38 3．3．5目的片段与表达载体的连接 _ 39 3．3．6连接产物转化大肠杆菌 ．．． 39 3．3．7重组质粒的筛选及鉴定 。： ．39 3．3．8重组质粒酶切验证 ．39 3．3．9重组质粒导入根癌农杆菌EHAl05及筛选鉴定 40 3．4结果与分析 ．．4l 3．4．1玫瑰MYB基因超量表达载体的构建 4l 3．4．2重组质粒转化农杆菌 j ．44 3．5讨论 ： ．45 第四章前景展望 47 参考文献 ．．． ．48 附录 56 j}【谢 65 H 玫瑰MYB基因的克隆及超量表达载体的构建摘要 玫瑰MYB基因的克隆及超量表达载体的构建 摘要 玫瑰(Rosa rugosa Thunb．)是蔷薇科蔷薇属的一种重要的观赏植物，花型秀美， 芳香四溢，色彩绚丽。因其特有的芳香、花色及抗寒性、抗旱性，在环境条件日益 恶化的今天，在园林应用中有着巨大的发展潜力。从玫瑰花瓣中提取的精油，是世 界名贵的精油之_，素有“液体黄金之称。然而，一直以来人们对玫瑰的研究还 只是局限在栽培管理上，随着分子生物学和生物技术的迅猛发展，利用生物技术手 段来改良植物性状也成为了可能。 近年来，利用MYB类转录因子对观赏植物进行性状改良如花色、花香的研究， ‘逐渐成为研究的热点。 本研究采集玫瑰花瓣混合样进行转录组测序，并提取了高质量的花瓣混合样总 RNA，反转录合成cDNA。从转录组测序结果中筛选出13个MYB基因的EST序 列，以此设