霉酚酸酯治疗重型肝炎肝衰竭的实验和临床研究-内科学(传染病)专业毕业论文.docxVIP

博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 摘要 背景 我国乙型肝炎病毒(皿V)感染率约占人口10％．12％， 其中约l％．2％会导致急性肝衰竭。肝炎病毒引起的急性肝衰竭称为 重型肝炎。目前认为，HBV致重型肝炎、肝衰竭的机制主要包括原 发性损伤和继发性损伤，即“二次打击学说”。而且继发性损伤所起 的作用可能大于原发性损伤。原发性损伤是指机体在清除HBV时， 对肝细胞造成的直接的免疫病理损伤；继发性损伤是指在原发性免疫 病理损伤基础上，由于肝脏屏障功能受损，肠道细菌所产生的内毒素 容易通过肝脏形成自发性肠源性内毒素血症，内毒素则刺激肝内外单 核一吞噬细胞释放大量炎症细胞因子，不断加重肝细胞的破坏。霉酚 酸酯(Mycophenolate 1120fetil，MMF)，是霉酚酸(Mycophenolic acid， MPA)的2．乙酰基衍生物，MMF口服后在体内迅速水解为MPA， MPA可选择性抑制次黄嘌呤脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase，IMPDH)，从而抑制鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径， 进而抑制DNA和RNA的合成；由于淋巴细胞主要依赖经典合成途 径合成鸟嘌呤核苷酸，故MPA可选择性抑制增殖性T和B淋巴细胞， 从而抑制体液免疫和细胞免疫；对单核细胞释放炎症细胞因子，也有 明显的抑制作用。最近的研究表明，MPA对多种病毒复制有抑制作 用，包括黄热病毒、EB病毒、HIV、登革热病毒、丙型肝炎病毒等。 目的 基于重型肝炎的发病机制以及MMF的药理作用，推测 MMF可以通过抑制过强的免疫反应，抑制T淋巴细胞过度增殖，抑 制单核细胞释放炎症细胞因子等，而发挥其治疗重型肝炎的作用。因 此，作者通过细胞模型和动物模型，探讨MMF用于治疗重型肝炎的 可能性，在此基础上，将MMF试用于临床重型肝炎的治疗，探讨其 安全性和有效性，为重型肝炎的治疗提供新的思路和方法。 方法 (1)MMF的活性产物MPA抑制HBV复制的体外实验研究：以 HepG2 2,2，15细胞为HBV感染细胞模型，培养基中加入不同终浓度 的MPA或拉米夫定，或MPA加拉米夫定共培养，于第3、6、9天收 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 集培养上清行HBsAg定量检测：收集细胞提取总RNA，行RT-PCR 及荧光实时定量PCR测细胞内HBV mRNA水平；用MTT法观察药 物的细胞毒性。 (2)MMF对小鼠免疫性肝损伤治疗作用研究：雄性昆明小鼠，卡 介苗(BCG)2．5 m∥鼠尾静脉注射，10天后脂多糖(LPS)10 u∥ 鼠尾静脉注射，制备小鼠免疫性肝损伤模型；治疗组在LPS给药前2 小时、同时、或LPS给药后2小时给予MMF灌胃，对照组给予生理 盐水灌胃；比较两组小鼠的24小时存活率，血清转氨酶水平，肝脏 组织病理学改变，TNF．13．、IFN-?和IL一6等细胞因子肝组织mRNA 表达水平和血清浓度等，用MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性。 (3)MlvIF治疗重型肝炎的初步临床观察：治疗组和对照组患者各 25名，均为乙型慢性重型肝炎早期或中期患者；对照组给予对症支持、 抗感染、人工肝血浆置换等综合治疗，治疗组在上述综合治疗基础上， 加用MlVIF口服治疗，观察两组患者的好转率、血清总胆红素(TBIL)、 凝血酶原活动度(PTA)、血清TNF．Ⅱ和IL一6水平等指标。 结果 (1)MPA单独应用，浓度2肛∥m1—250¨∥ml无明显抗I-IBV作用， 当浓度达1，250斗g／rnl时，可使病毒mRNA水平下降1—2 log，上清中 HBsAg滴度也有相应降低：拉米夫定5肛∥ml可使病毒mRNA水平 下降3．4 log，上清中HBsAg滴度也有相应降低：MPA和拉米夫定合 用时，可显著增强后者的抗HBV作用，其浓度为10 gg／ml时促进作 用最明显。 (2)BCG儿PS可通过免疫性肝损伤导致小鼠致死性肝衰竭，24 小时存活率20％(4／20)，组织学检查可见大面积肝坏死，血清转氨 酶明显增高，TNF．d、IFN-Y和IL．6等细胞因子肝组织mRNA表达 水平和血清浓度明显增高；MMF治疗可显著提高小鼠存活率(84．2 ％，16／19)，减轻肝脏病变程度，降低血清转氨酶，降低TNF—d等细 胞因子的肝组织mRNA水平和血清浓度，抑制脾淋巴细胞增殖。 (3)治疗组和对照组患者治疗前越J、TBIL、PTA等肝功能指 标和病程长短无差别，治疗组好转率80％(20／25)，显著高于对照组的 52．