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- 2019-05-08 发布于上海
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美洲鳗鲡与其养殖水体细菌的耐药性、抗性基因 及整合子的研究
摘 要
在养殖中不可避免地直接或间接使用过抗菌药物,如此养殖出来的水产品往往携带耐 药细菌,不仅削弱抗菌药物对动物细菌性疾病的控制效果,且还存在向人类致病菌传播耐 药性的潜在风险。本文研究美洲鳗鲡及其养殖水体分离耐药细菌,并分析耐药细菌的种属 组成、耐药性、特定耐药基因及耐药整合子,进而利用传代实验研究细菌耐药性的消除。 经抗性平板筛选出 108 株耐药菌,由 16S rDNA 鉴定属于 4 纲 20 个属,γ-变形菌纲的
气单胞菌属(24.1%)、柠檬酸杆菌属(17.6%)和不动杆菌属(16.7%)的出现频率最高。
对 17 种抗菌药物的药敏试验结果显示,108 株耐药菌株对阿莫西林的耐药率高达
90.7%,对四环素、抗叶酸类、酰胺醇类、利福平类的耐药率也在 60%~80%之间。93.5%
(101/108)的菌株对 3 种及以上的药物具有抗性,其中有两株对 13 种抗菌药具有抗性,
两株对 14 种抗菌药具有抗性。美洲鳗鲡的肠道、表皮、鳃部及水样分离菌株的多重耐药 指数中水样的最高。分离菌株数较多菌属中柠檬酸杆菌属和克雷伯菌属的耐药水平最高, 而不动杆菌属则相对较低。
对 29 种抗性基因的 PCR 检测结果显示,耐药菌株中耐β-内酰胺类药物的基因 blaTEM 检出率高达 100%,耐药基因 tetC 和 sulI 的检出率也高达 96.3%。其次,aadA 和 floR 的检 出率分别为 74.1%和 69.4%,qnrB、arr2/3 的检出率在 50%左右。此外,在本研究中,所 有菌株至少检测到两种抗性基因,其中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)C11 检测到 18 种抗性基因。
108 株耐药菌株中 86 株含有 I 型整合子,10 株携带 II 型整合子,没有检测到 III 型整 合子。10 株携带 II 型整合子的菌株均同时携带 I 型整合子。I 型整合酶阳性菌株有 74 株成 功扩增可变区,其中 33 株携带空整合子,另外 41 株菌的整合子共含有 14 种不同基因盒 排 列 。 包 括 一 种 新 的 基 因 盒 排 列 : dfrB4-catB3-blaOXA-10-aadA1 , 基 因 盒 排 列 dfrA12-orfF-aadA2 分布最为广泛。基因盒排列中优势基因盒为 dfr 和 aad 基因家族。10 株 intIII 阳性菌株全部都扩增出可变区,均含有相同的基因盒排列 dfrA1-catB2-sat2-aadA1。
耐药菌株 T4 以空白 MH 肉汤进行传代培养,随着代数的累加,对 TET 耐药的菌群比 例迅速下降。紫外照射不影响 T4 菌株耐药性。而低浓度 TET 和 37 ℃高温实验组传代子的 耐药率基本保持在 100%,这意味着低浓度抗生素和高温等逆境可以保持细菌耐药性的稳 定。此外 SDS 的存在也不利于 T4 耐药性的消除。T4 原代所携带的基因中,经 PCR 扩增 检测到 strA/B、aphA1 和 blaTEM 基因在耐药性消除菌株中仍然稳定存在未被消除,而 tetD、 floR、dfrA12 和 I 型整合子均消除未见。
本研究分析了美洲鳗鲡养殖生态群落中耐药菌的多样性、种属分布以及多重耐药情
I
况;补充了美洲鳗鲡动物源细菌在抗性基因和整合子研究方面的匮乏和不足;同时研究了
耐药性消除的影响因素,以探索消除细菌耐药性的可能途径。 关键词:美洲鳗鲡;耐药细菌;多重耐药性;耐药基因;整合子;耐药性消除
II
Occurrence of antibiotic resistance and incidence of antimicrobial-resistance genes and integrons in bacteria isolated from Anguillarostrata and farming water
Abstract
Aquaculture has used antimicrobials direc
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