米曲霉工程菌中无痕缺失pfkA基因促进其CBP法合成木糖醇-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docx

摘要 摘要 华侨大 华侨大学硕士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘要 一体化生物加工过程 (Consolidated bioprocessing，CBP) 是指在不添加任何 外源水解酶的情况下，直接将木质纤维素原料一步转化为生物化学品的生物加 工过程。CBP 已被公认为是木质纤维素生物质低成本水解和发酵的最终配置。 米曲霉作为重要的食品安全生产菌，天然具备较高活力的半纤维素水解酶系和 木糖分解代谢相关酶系，是实现半纤维素原料直接转化木糖醇的潜在 CBP 理想 菌株。本课题组前期利用分子生物学技术，缺失米曲霉木糖醇脱氢酶 XDH 基因 xdh，阻断木糖醇分解途径，提高了木糖醇产量，实现了半纤维素直接合成木糖 醇的 CBP 方式。然而，xdh 基因缺失以后，木糖醇大部分分泌到胞外，减少了 PPP 和 EMP 途径代谢通量，菌株生长速度减缓。而 PPP 途径是木糖代谢产生 NADPH 的最主要途径，NADPH 的缺乏，可能抑制依赖 NADPH 的木糖还原酶 XR 的酶活力，成为影响木糖醇产量进一步提高的限制因素。 本研究在 xdh 缺失的工程菌 A. oryzae xdhD30-1 基础上，利用筛选标记可循 环利用的拉图尔系统（Latour system），继续敲除糖酵解途径中的磷酸果糖激酶 PFK 基因 pfkA，以期增加 PPP 途径代谢流，提高胞内 NADPH 浓