抗癌药物亚硒酸钠诱导的Jurkat细胞凋亡的可能机理分析-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

摘要微管在细胞的许多过程中发挥着重要作用，如有丝分裂、胞内运输、膜围细胞器的定 摘要 微管在细胞的许多过程中发挥着重要作用，如有丝分裂、胞内运输、膜围细胞器的定 何以及细胞形态保持等等。微管能根据细胞的需要改变其组织形式及稳定性，从而完成其 功能。微管的功能依赖于其动态不稳定性。 微管是许多抗癌药物(如紫杉醇、秋水仙素及长春花碱)作用的靶子。在较高浓度下， 这些试剂或促进微管蛋白聚合。增加纺锤体微管的量；或抑制其聚合，减少纺锤体微管的 坩。任斗11对较低的浓度下，这些药物可以不影响微管的量而强烈抑制微管的动态不稳定性． 硒是生物系统的一种必需微量元素，能够调节许多胞内蛋白的功能。而大多数受其调 节的蛋白与胞内信号转导有关。亚硒酸钠能够引起自血病细胞凋亡并作为一种治疗白血病 的药物，但其作用机理仍不清楚。亚硒酸钠是否会象紫杉醇等抗癌药物一样以微管蛋白作 为靶于? 为了解答这个问题，我们研究了亚硒酸钠对白血病细胞株Jurkat细胞中微管的作用。 我t／JhE实：209M亚硒酸钠处理48小时后，Jurkat细胞发生凋亡。处理细胞呈现典型的凋亡 特征：DNA梯状电泳。核固缩现象，细胞间松散。免疫荧光标记结果表明，处理细胞没有 正常的网络状微管，而是呈现弥散状分布。 我们还研究了亚硒酸钠对微管蛋白体外聚合的影响。其中一组实验是在相同的微管蛋 Fj体系中加入不同浓度的亚硒酸钠，然后加入GTP，37C聚合．离心，沉淀为聚合的微管， 而I一清液为未聚合的微管蛋白。另一组实验是在聚合好的微管溶液中加入不同浓度的亚硒 酸钠，继续37{2水浴，离心。SOS～PAGE结果表明，亚硒酸钠不仅能抑制微管蛋白聚合，还 能促进微管解聚。 电镜负染结果表明，其它条件相同时，正常聚合的微管形成稠密的网络状，而加入亚 硒艘钠后聚合的微管则很稀少，而且长度大大变短。证明亚硒酸钠确实能抑制微管聚合。 我们证明了致硒酸钠能与微管蛋白结合。首先，在非变性电泳中，加入亚硒酸钠的锾 管蛋自的备寡聚体的迁移率比对照增大。这可能是因为微管蛋白与SeOl结合后．增加了负 电衍的缘故。其次，微管蛋白与过量亚硒酸钠反应后，用Sephadex G-25脱盐柱除去游离 的哑硒酸钠，发现蛋白中存在相当数量的硒。结果表明每个微管蛋白二聚体能与3．46个亚 硒酸钠分子结合。再次，随着亚硒酸钠浓度的增高，微管蛋白的内源色氮酸荧光强度逐渐 降低。另外，我们证明亚硒酸钠能够改变微管蛋白的二级结构。这都说明亚硒酸钠与微管 贷l’1结合后改变了微管蛋白的构象。 哑硒酸钠对微管蛋白聚合的抑制作用能被DTT和B一巯基乙醇逆转，说明弧硒酸钠是通 过讯化一还原机制发生作用的。 l，1{， ff√ 关键词： Ⅱ硒酸钠，微管蛋白，聚埝，，凋亡，自血病细胞 lV Sodium Sodium Selenite，a Cancer Chemoprevention Chemical， Alters the Microtubules Assembly and Induces Apoptosis of Jurkat T Cell ABSTRACT Microtubules(MTs)play important roles in many essential cell functions including mitosis，intracellular transport，positioning of membrane-bounded organelles，and cell shape．They perform many of their cellular tasks by changing their organization and stability in response to the needs ofthe cell．These tasks seem to depend on the unusual nonequilibrium dynamic behaviors ofMIs． Microtubules are the targets for a large number of antitumor drugs including tax01．colchicine and vinblastine．Most such agents either inhibit or promote microtubule polymerization and，at appropriately high concentrations，they either increase or decrease the spindle micrombllle mass．But they all strongly suppress the dynamics o