蜜环菌糖复合物的分离纯化、结构分析与生物活性的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要蜜环菌糖复合物的分离纯化、结构分析与 中文摘要 蜜环菌糖复合物的分离纯化、结构分析与 生物活性的研究 摘要 本实验塞对蜜醛蕴莹索发簿条件帮瑰海、魏井多糖鹃药效学已经有大量研 究，本文戬攘嚣麓蓉索黪内糕多糖矗聪迸一步缝纯缎分矗％一18为研究对象，通 过部分酸泰然改造其他学结搦，磷究结梅与生物活径的关系，跌不蓠角度研究 了其洚盎糖作用，出l迦探讨英降斑糖活毪豹依焉梳理。内容包括：糖复合物 越G—18豹提取分离、缝纯，囊纯校震，纯学结构豹渡交藏降斑糖活穗豹研究。 1．糖复会穆矗满一lB游提教分离、缝纯 粼翡筑俄路线；黼粳提秘DE矗嚣一纤维索柱色谱(cl‘型- se婶醚exG一75凝胶柱色谱—，纯黼矗醅G—18。 矗滋镪多统纯采麓离予交换层析法。选丽阴离子交换纤维索DE一52(c1“型)， 洗脱裁为氇0、辩acl O．5mol／L，分离捧捌A黼一l和A艟G一2。 嬲一l透析脱去小分予物质(分子蠢800∞a)籍，缀葡聚糖凝胶 se两adexp75进一步统纯得到A蹒一1A和捌G—lB。分鄹采用Sepharose 4B凝胺 柱藤祈、勰张一purifierlO快速层析纯化系统(FPw)和聚丙烯酰胺圆盘电泳对 A隔一1A和A黼一lB迸彳亍纯度鋈定，结果表明AMG—lB为均一组分。 2．理纯性质和结构分析 对A黼一1A和A黼一lB进静定谶分析：紫外掴描200nm～400nm，AMplA在 260nIIl～28011m楚有～小的吸收峰，A粥一1B几乎没有吸收：红外光谱结果表明， 翎∽lB在4∞Ocm-。～650cm．1隧具有多糖类物质的～般特征，同时在980cm～、 920cm-1附近有皂瞀的特{芷吸收峰。对：者缎成成分定量分析：测定了蛋白质、 多糖、耱醛酸、皂苷禽量。用气相色谱检测AMG一1A、AMG一1B的糖链组成，分析 得AMG—lA的糖链部分由D一鼠牵糖，D一岩藻糖，D一阿拉伯糖，D一甘露糖，D一葡萄 查登蔓董篓盒塑塑坌罡丝堡：苎丝坌塑量竺塑堡堡堕堡塞 查登蔓董篓盒塑塑坌罡丝堡：苎丝坌塑量竺塑堡堡堕堡塞 糖，D一半乳禧组成，A黼一18由D一鬣李糖，D一甘露糖，D一葡萄糖组成。 3．亿学结构改交 以A黼一lB为结构和活性关系的研究对藩。对AMG一1B的糖链进行结构改造， 裉据部分酸降解条件的正交试验，确定了以4％，40℃，50mi n-6％{40℃，60min： 8％，50℃，40min；10％，50℃，30min细种水解条件下的水解片段为生物活性研 究对象。 对网种水解片段的组成成分定量分析：包括蛋自质、多糖、糖醛酸、皂苷 含璧。采用凝胶色谱法测定AMG一1B和四种水解片段的相对分予量，随着酸浓度 的增加，水解片段的相对分子擅逐渐降低。 4．降血糖生物活性的研究 首先从动物水平研究AM∽1B的降斑糖活性，确定AMG—lB能显著降低正常 小鼠的餐后高血糖；褥从体外细胞水平和分子水平研究AMplB和四种水解片段 的降血糖作用，探讨结构改变与生物活性的关系和降血糖作用机理。对a一葡馥 糖替酶抑制作用的实验表明，粗品AMG一1对予a一葡萄糖替酶几乎没有抑制作用， 纯化后的组分A碱G_lA、A粥一1B有抑制作用，其中均一组分AMG—lB的抑制率比 AMG一1A高；和AMG一1B相比，四种水解片断对q一葡萄糖替酶的抑制率明显提塞。 HepGz细胞模型研究表明：AMG—lB、4％和6％两种水解片段是通过直接圣乍用于黔 细胞产生降m糖作用，而8％和1096片段没有显蓑的促进肝细胞糖代谢作熙。体 外非酶糖基化实骏表腿，AMG一1B和四种水解片段对昂期糖基化产物具有明显的 抑制作用，旦水解片段的溉性提高。 关键词：蜜环菌糠复食物，酸水解，构效关系，a．麓萄糖瞢冁， 蛋白非酶禳基化 蒜文摘簧Isolation，p娃l‘越c建tio珏，S毫r糕c重娃l’e 蒜文摘簧 Isolation，p娃l‘越c建tio珏，S毫r糕c重娃l’e A珏纛lys弧 a魏IdI B_洒s巍e意主v耋ties o}fA删越酝跨睡庇艮赫缎 Glycoconjugates A融straet 氇。穗efto搬a娩囊l差l辩疆蛙蛰№8c畦ve磷ySaee磷§瓤臌垃砖辫∞li鑫of z瑚踟酗粼西嘲怂疽G。lB州五ed鼬m』重m池矿胁删口＆口gI弦oconjugates C觚僻) was s枷died．1k ma汹work inclu如朋ⅥG exh糊_【ion，p砸fic馥tio玛physical and 豳e眭e鞋拶印。堪髂i嬷翥c矗_蛙螭壤e o勉裙of c酝躐e蘸s蠡狂强霞瓣巷珏弹。簦yce藏e activi蜉gtl棚es． 1．AMO ex咖ction’pu顺cation 珏o。x矬凝蛙馘鑫耐心磊e蘸继掣∞拳良砖of囊熬G毡鞠瞪嚣热ll渊：c奴汝A轰耋G —-D勘蝤wc