黄河裸裂尻鱼肌肉生长抑制素基因克隆及其表达特征研究-动物营养与饲料科学专业毕业论文.docxVIP

I I 主要符号对照表 MSTN 肌肉生长抑制素 (myostatin) GDF-8 生长分化因子 8（growth differentiation factor 8） TGF-β 转化生长因子 β（transforming growth factor beta） INH 抑制素（inhibin） ACT 活化素（activin） BMP 骨成形蛋白（bone morphogenetic protein） MIS 米勒抑制物（mullerian inhibiting substance） AMH 抗米勒激素（antimullerian hormone） GDNF 胶质细胞系来源的神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor） MyoD 成肌分化抗原（Myogenic Differentiation Antigen） Mck 肌肉肌酸激酶 RNAi RNA 干扰 LRH 促黄体素释放激素类似物 PG 脑垂体 HCG 鱼用绒毛膜促性腺激素 DOM 马来酸地欧酮 DEPC 焦碳酸二乙酯 GAPDH 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 ORF 开放阅读框 IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 青海大学 青海大学硕士学位论文 摘 要 II II 摘 要 肌 肉 生 长 抑 制 素 (myostatin, MSTN) 是 转 化 生 长 因 子 β(TGF-β)超家 族中的一 个新成员，对骨骼肌 的发育 和生长具有负 调控作用。MSTN 基因 的敲除 、沉默 或抑制 表达将引 起动物 肌细 胞增生和 肌纤维 的肥 大，从 而增 加动物肌 肉产量 。黄 河裸裂尻 鱼是裂腹鱼 亚科鱼类 的代表 种，在青藏高 原 淡水生态 系统的 食物 链中具有 重要的 地位 。但是 ，同裂腹鱼亚 科 鱼类一样 ， 黄河裸裂 尻鱼固 有的 生物学特 性，如生 长 期短、生长 缓慢、性 成熟迟、繁 殖力低 等 ， 极 大 地 限 制 了 该 种 群 的 发 展 。 本 研 究 采用 RT-PCR、 5-RACE 和 3-RACE 法获 得黄 河裸裂尻 鱼 MSTN 基 因全长 cDNA 序列，并分析了 其 序列特征；采用 半定量 RT-PCR 和 Real-Time PCR 检测了 MSTN 基因的组 织表达特 异性和 胚胎 发育阶段 的表达 特征 ；同时 ，构 建了 肌 肉 生长抑制 素 成熟肽序 列的原 核表 达载体并 进行表 达。 主要研究 结果如 下： 1、黄 河裸裂 尻鱼受 精 卵在水温 8.6～14.5℃ ，经 11 天孵 化破膜 ，孵化 积温为 158.2℃·d。与 裂腹鱼亚 科的其 他鱼 类相 比较，黄河裸 裂 尻鱼的胚 胎 发育相对 较慢。 2、黄河裸 裂尻鱼 MSTN 基因全长 cDNA 序列为 2180 bp，其开 放阅读 框长 1128 bp，编码 375 个氨基 酸。5-端非 翻译区长 76 bp，3-端非翻译 区 长 976 bp， 包括 3-端 polyA 尾和上 游加 尾信号序 列 (ATAAA)。在其 N 末 端含有一 个 22 个氨 基酸组成 的信号 肽序 列。 3、黄河 裸裂尻 鱼 MSTN 基因 与其 他脊椎 动物具有 相似的 基因 结构， 包括 2 个 内含子 和 3 个外显子 。 4、黄河 裸裂 尻鱼 MSTN 包含 两端保 守区 域：TGF-β 前 肽区域 (41~257 bp)和 TGF-β 功能区域(278~375 bp)，并 具 有典型的 RXXR 蛋 白 酶水解位 点 (263~266 bp)。 5、MSTN 基因在 黄河 裸裂尻鱼 9 个被 检组 织中均有 表达 ，但在 心、肾 、 肠、精 巢中表 达量较 高 ；在 胚胎中 的相对 表达量随 胚胎发 育阶 段的不同 而 III III 有所差异 ，暗示 MSTN 的功 能可能 并不局 限在对肌 肉生长 发育 的负调控 作 用，可能 还有其 他功 能 。 6 、 成 功 构 建 了 黄 河 裸 裂 尻 鱼 MSTN 成 熟 肽 序 列 原 核 表 达 载 体 （pGEM-4T-1-MSTNm (+)），经 BL21 原核表达且纯化获得较高纯度的目的蛋白， 为后期制备抗体开展 MSTN 基因的表达调控研究奠定了基础。 关键词： 黄河裸裂尻 鱼 肌 肉生长 抑制素 克隆 表 达特征 原核表达 青海大学 青海大学硕士学位论文 第 2 章 黄河裸裂尻鱼人工繁殖与受精卵发育观察 PAGE PAGE 10 Abstract Myostatin (MSTN) is a new member of the TGF-β superfamily that acts as a negative r