甘油检测试剂盒.DOC

上海市永兴路258弄兴亚广场1号楼1404室，邮编200071；电话021传真021 E-mail:bio-excellent@ 甘油检测试剂盒 （酶学试剂盒） 酶法分析试剂盒（紫外分光光度法） RIDASCREEN（产品编号：0 414 433） 30次检测 上海必优生物科技有限公司 上海市永兴路258弄兴亚广场1号楼1404室，邮编200071；电话021传真021 简介 酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）此法适用于检测食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妆品、药品（溶液、栓剂）、纸板、烟草及生物制品中的甘油。 2. 原理 甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯，ATP转化为ADP； 反应式为 GK Glycerol﹢ATP L-glycerol-3-phosphate﹢ADP 上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯； 反应式为 PK ADP﹢PEP ATP﹢Pyruvate 丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD； 反应式为 L-LDH Pyruvate﹢NADH﹢H﹢ L-lactate﹢NAD﹢ 被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下测量。 3. 试剂盒内容物 ----瓶1共有3瓶，每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸缓冲液， PH约7.4； NADH约7mg；ATP约22mg；PEP-CHA约11mg；硫酸镁 ----瓶2约0.4ml悬浮物，包括： 丙酮酸激酶，约240U； L-乳酸酯脱氢酶，约220U ----瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物，约34U ----瓶4为甘油检测对照溶液（甘油检测对照溶液可不需要计算结果），此溶液使用时不需稀释。（效期见标签） 4. 检测溶液的制备 （10次） ----取出1瓶瓶1， 用11ml重蒸水溶解，使用时此溶液需在20-25℃ ----瓶 2不需稀释 ----瓶 3不需稀释 5. 操作者应该注意之事项 使用前请仔细阅读，中文翻译件仅供参考 ----瓶1约含500mg碳酸钠，应避免接触皮肤和呼吸器官，其他用于甘油检测的试剂不具有危险性 ----实验之后，用过的试剂可作为实验室废料处理，但必须在当地法规允许的前提下 6. 储存条件 ----瓶 1在2-8℃下保存（见标签），溶液1在2-8℃ ----瓶2及3在2-8℃ 7. 样品处理 ----直接取用无色，透明，中性的溶液或按稀释表格稀释后进行检测，体积为2.000ml ----过滤混浊溶液 ----除去样品溶液中的二氧化碳气体 ----加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8 ----对于深颜色的样品溶液可不需稀释或者用PVPP或酰胺配成较高浓度的溶液如：1g/100ml ----粉碎或均质固体和半固体样品，用水抽提或溶解，而后过滤，通过Carrez澄清液可脱去其中的混浊物或色素 ----用Carrez试剂可脱去样品中的蛋白质 ----用热水抽提样品中的脂肪（抽提温度需在脂肪的溶解度之上），冷却后可分离出脂肪，将余下物质转移至容量瓶中并加水至刻度，冰浴15分钟而后过滤，热水抽提后用Carrez溶液澄清 8. 过程 1. 波长：340nm，Hg365nm或Hg334nm 2. 比色杯：光径1.0cm 3. 温度：20-25 4. 最终体积：3.020ml 5. 对照空气（光路上无比色杯）或对照水读取读数 6. 样品溶液：1-40ug甘油/检测（体积为0.100-2.000ml样品体积） 具体操作见如下表格 移液 空白（ml） 样品（ml） 溶液1 样品溶液 重蒸水 悬浮物2 1.000 - 2.000 0.010 1.000 0.100 1.900 0.010 混和，直至前反应完全反应后，约5-7分钟，读取吸光度值A1，而后加入下列物质： 悬浮物3 0.010 0.010 混和，等反应进行完全后（约5-10分钟），立即读取样品和空白的吸光度值A2 如果在15分钟后反应尚未停止，则在2分钟的间隔内继续读取读数，直至此值不再变化。 分别测样品与空白的吸光度值差，而后用样品吸光度值差减去空白吸光度值差可以得到如下公式 △A=(A1 ―A2)Sample―(A1 ―A2)blank 若想得到一个足够精确的结果，则测得的吸光度的单位至少为0.100单位。 如果吸光度值差△A在334及340nm下测得的值