棉纤维次生壁增厚启始相关基因的cDNA克隆及分析-作物栽培与耕作学专业毕业论文.docxVIP

摘要r迄今，克隆棉纤维发育相关基因多以伸长期的纤维为研究对象。已分离到几十个与棉 摘要 r迄今，克隆棉纤维发育相关基因多以伸长期的纤维为研究对象。已分离到几十个与棉 纤维发育相关的基因，但尚未得到决定棉纤维发育及纤维品质性状形成的主效基因。由于 纤维强度是首要的品质指标，它形成于次生壁增厚期，所以对纤维次生壁增厚期的研究具 、 有重要的意义J 本文以陆地棉品种“徐州142”植株条件下开花后14、18、24、30d(分别记为x-l、 X．2、X．3和x-4)的棉纤维和胚珠培养至开花后14d的棉纤维(其中，处理材料P“用添 加ABA的培养基继代培养5小时。对照P-tcK则不加ABA)为研究材料．用差异显示技术 分析其基因表达差异，试图获得既在次生壁增厚期开始表达、又被_^BA诱导表达的eDNA 克隆。／结果如下： 1．采用热酚法提取RNA，得到纯度高、完整性好的RNA。 2．用差异显示技术展示植株条件下开花后14、18、24、30d的棉纤维和胚珠培养至开花 后14d的棉纤维的基因表达情况，分析次生壁增厚启始和ABA诱导前后基因表达的差 异。回收到20条差异带，其中的13条是从P，t中获得的。 3．以P。。的RNA为探针进行第一轮Reverse Northern杂交，得到9条阳性的差异带。 4．分别以P¨、P1．CK、X．1、X．2、X．3和X-4的RNA为探针进行第二轮Reverse Northern 杂交，得到5个阳性的差异片段。其中，1个(编号为I·)为质上的差异，在次生壁增 厚启始时表达，又被^BA诱导表达；其余4个为量上的差异，其中1个(编号为II·) 由ABA诱导增强表达。另外3个(编号分别为IIz、II。、II·)由ABA抑制表达。 5．Blastx分析表明．这5个cDNA克隆在棉花中均为新的EST。其中I·与拟南芥蛋白激 酶的同源性为51％，推测其为堡鱼堂堕基垦·II-、II。、IIs、II·与普通烟草的细胞色 素P450单加氧酶、乙二醛酶I、异黄酮还原酶同系物TP5、1116和异黄酮还原酶(拟南 芥)同源，同源性分别为92％、85％、4“和65％。推测这5个EST均与次生壁增厚启 始有关·1 ／ 关键词：棉花；纤维发育，次生壁增厚；差异显罨 AbstractUp Abstract Up to now,genes related to eoRon fiber development are cloned from elongating fiber． Dozens of genes have been isolated，but none is the main gene determining the development and formation of quality trait of eoRon fiber．Because fiber strength is the chief quailty trait and determined during secondary wall thickening，it’S important to study on the secondary wall thickening ofcotton fibeL Cotton(Gossypium hfrsutum L．ev XuZhoul42)fiber of field-grown plant collected on 14DPA，18DPA，24DPA，30DPA。which were nttmbered X-1，X一2，X-3，X-4，respectively,and that ofovules cultured from 2DEA to 14D队collected after subculture on the medium contained 100 u mel．L-‘ABA or 0 u mel．L．1ABA for five hours，which were numbered P14 and P14CK， respectively,were used for each experiment．In order to isolate cDNAs bom beginning to express during secondary wall thickening and expressing induced by ABA，DDRT-PCR was used to analyze difference of gene expression of the fiber described∞above．The results ale shown as follows： 1．The hot phenol method was adop