抗链霉素单克隆抗体制备与ELISA方法的建立-生物物理专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 为探索一种能快速而有效监测食品中链霉素残留的方法，本研究利用合成的链霉素．肟与 牛血清白蛋白偶联，制备成全抗原后免疫Balb／c小鼠，用杂交瘤技术建立了一株能稳定分泌抗 链霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。命名为3B】．G口C12，并对此细胞进行了鉴定和抗体应用的 初步研究。 3BI．G12．C12抗体的鉴定结果为：抗体属IgGl亚类：与双氢链霉素的交叉反应率为120％， 与庆大霉素、卡那霉素、新霉素的交叉反应均小于0．1％。间接酶联免疫吸附试验测定细胞上 清抗体效价为1：104以上，腹水抗体效价为1：108以上。秋水仙素阻抑法计算该细胞染色体数 平均为96，体外传代培养和冻存复苏后分泌抗体稳定。 以381-(312-C12单抗为基础，建立了间接竞争性抑制ELISA方法，该方法对硫酸链霉素的 最低检出量为2ng／ml，尿及牛奶添加回收率为90％～105％。 与其它方法综合对照最低检出量、效率、精确度、费用等参数可得出用ELISA检测链霉 素残留是一种商效、快捷、可靠的方法，可大力推广应用。 关键词：链霉素，单克隆抗体，ELISA，残留检测 Ill AbstractOur Abstract Our research aimed to find a better means to detect the strepomycin residue in food．The antigen was synthesized by using a strepomycin—oxime derivative coupled to bovine serum albumin，then injected to Balb，c mouse．A cell line，381一(312-Ci2，which secretes monoclonal antibodies against streptomycin stably was abtained by the technology ofbybridoma． The antibody characterized by IgGl isotype and the only detectable cross-reactivity was shown to be with dihydrostreptomycin of about 120％．nle hybridoma cells line which average number of chromosome 96 steadily secretes antibodies after subcultured 1 5 times．The ELISA titers of cells supemate and ascites were exceeded l：1．0X 104 and 1：1．O×108 seperately． An indirect competitive ELISA was founded base on the monoclonal antibody．It’s detectinon limit for streptomycin was 2．0 ng／m1．Recovery range in milk and urine is from 90％to 105％． We carl say ELISA is a better means to deter the streptomycin residue in food by comparing limit， efficiency,definition，fee，et a1．with other means． Keyword：Strepomycin，Monoclonal antibody,ELISA，Residue detection r鼢855独创性声明 r鼢855 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名 互鬃 时间： 别?年厂月／孑日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 王谦 时间： 朋3年／月馏日 导师签名： 奄妻