黄鳝肝脏超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

黄鳝盯脏超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质本文所用缩写符号 黄鳝盯脏超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质 本文所用缩写符号 SOD Superoxide dismutase 超氧化物歧化酶 Acrylamide 丙烯酰胺 Bis N，N’-Methylenebisacrylamide 甲叉烈丙烯酰胺 Ammonium persulfata 过硫酸铵 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SDS·PAGE Sodium dodecyl sulfate polyacrlamide ge electrophoresis SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳 Tris(hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 TEMED N、N，N’，N’-tetramethylethyendiamine N，N，N’，N’-四甲基乙二胺 Nitroblue tetrazolium 氮蓝四唑 lodoacetic acid． 碘乙酸 NBS N-Bromosuccinimicle N．琥珀酰弧胺 PCMB P．ch[oromercuribenzoic acid 对氯汞苯甲酸 PMSF PhenyImethylsuIfony fluoride 苯甲酰基璜酰氟 SUAN Succinic anhydride 琥珀酸酐 1NBS 2，4，6-trinitrobenzen sulfonie acid 2，4，6-三硝基苯璜酸 PBS Phosphate buffe 磷酸缓冲液 黄鳝肝脏超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质黄鳝肝脏超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究 黄鳝肝脏超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质 黄鳝肝脏超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究 ——一“一iij|一——————一 专 业： 生物化学与分子生物学 研究方向 酶与酶T程 指导教师：唐云明 研究生 沈洪国 超氧化物歧化酶是一种能够催化超氧化物阴离子自由基(0：) 发生歧化反应，生成氧 气和过氧化氢，从而清除0‘：的金属酶．它，“泛的存在丁=-生物体内。目前已从细菌、藻类、 霉菌、植物、昆虫、鱼类、鸟类和动物中分离得到SOD。升广泛的应用到化妆品、医药、食 晶添加剂及许多疾病的检测方面。但大多数都是从动物血液中分离纯化的，因为动物体内 SOD含量多，活性高，相对来说免疫原性小。 黄鳝是我国重要的淡水鱼类。广泛分布于全国各地。黄鳝营养丰富，肉质鲜美，寓含很 多对人身体有益氨基酸．以及独特的药用价值．深受国内外消费者青睐。可以说黄鳝具有很 人的经济价值。过去关丁其形态学、繁殖习性和生态学有着广泛的研究。但对黄鳝超氧化物 歧化酶的研究尚未有报道，本文主要对黄鳝超氧化物歧化酶进行分离纯化与性质进行研究， 以及一些修饰剂对酶活性的影响，为黄鳝SOD的开发利_L}_{奠定基础。 1．允离纯化 将黄鳝肝脏洗净。加入Tris-HCl缓冲液进行组织捣碎抽提SOD，高速离心取上清。将 上清液加入止丁醇脱脂、离心：将上清}{{丙酮分级沉淀，然后再将沉淀片j双蒸水溶解，在 60C水浴中加热20min，离心去除部分杂蛋白．获得粗酶液。将粗酶液上DEAE_琼脂糖柱层析， 得到一个活力峰，收集、透析、干燥浓缩；再上Sephacryl S-200凝胶柱层析，收集、透析、 干燥浓缩得到SOD纯品。然后在将SOD纯品进行等电聚焦和sDs一聚丙烯酰胺凝胶电泳。酶 的最终提纯倍数为368．5，比活力为1500u／mg，同收率为24．7％。 2．性质研究 通过敏感性试验．IOmmol／LKCN对酶的活性没有影响，而当加入50 l lOOmmol／L H：O： 时，酶的活力丧失52％．再测得酶的紫外吸收峰在280nm处，．从而可以确定黄鳝肝脏SOD 为Fe—SOD：凝胶过滤法测得黄鳝肝脏SOD的分子量为85 000 O，再通过SDS一聚丙烯酰胺凝 胶电泳测得黄鳍肝脏SOD的亚基分子量为16 500 D。等电聚焦电泳测得黄鳝肝脏SOD的等 电点为7．15。 黄鳝SOD具有很高的热稳定性，