慢性胰腺炎至胰腺癌演变模型中Hedgehog通路的分子机制-内科学消化疾病专业毕业论文.docxVIP

慢性胰腺炎至胰腺癌演变模型中 慢性胰腺炎至胰腺癌演变模型中 Hedgehog 通路的分子机制 第二军医大学博士学位论文 第二军医大学博士学位论文 - - PAGE 1 - - - PAGE 2 - 摘 要 一、研究背景 慢性胰腺炎（chronic pancreatitis，CP）是一种多因素共同参与的炎症过程，胰腺 小叶内或小叶间纤维组织大量增生累及胰腺实质和胰管结构，导致胰腺内外分泌功能 受损，其特征是胰腺星状细胞（pancreatic stellate cells，PSCs）活化，合成并释放大 量细胞外基质蛋白、炎症介质和细胞因子，引起胰腺组织进行性纤维化。 胰腺癌恶性程度高，预后差，其病因及发病机制尚未完全阐明。其症状隐匿、恶 性程度高、转移早、早期诊断困难，大多数患者在确诊后由于进展期恶性病变的出现 而无法施行根治手术，5年生存率小于5% 。临床上很难获得新鲜的、不同时期的胰腺 癌组织标本，更不可能在临床上观察胰腺癌发生、发展的过程。因此，为了研究解决 胰腺癌的发生机制、病理变化过程以及临床的早期诊断和治疗等问题，需要建立胰腺 癌的动物实验模型。 Hedgehog信号通路是调节胚胎发育过程中的主要信号通路，由Hedgehog配体、2 个跨膜蛋白受体Ptc和Smo以及下游转录因子Gli蛋白等组成。Ptc和Smo是位于细胞膜 上的跨膜蛋白，其中Ptc为Hedgehog的受体，能与Hedgehog蛋白结合。当不存在 Hedgehog蛋白时，Ptc抑制Smo的活性，进而抑制下游基因的转录表达。当Hedgehog 蛋白与Ptc结合时，Smo上的抑制效应被解除，激活下游的转录调节因子Gli，G1i蛋白 进入核内激活下游靶基因转录。Hedgehog信号通路与某些恶性肿瘤的发生发展有关， 包括胰腺癌在内的许多恶性肿瘤中均可观察到Hedgehog信号通路的异常表达。 环巴明(cyclopamine)是Hh通路的特异性抑制剂，一种从百合科藜芦属植物中提 取的异甾体类生物碱，具有明显的抗肿瘤作用。cyclopamine主要通过与Smo结合使Smo 的空间构象发生改变，抑制Smo的活性，从而抑制Hh信号通路的活性，发挥抗肿瘤作 用。Thayer等对胰腺癌体外细胞试验和转基因动物模型的体内试验研究均显示 cyclopamine可诱导肿瘤细胞凋亡，能明显抑制胰腺肿瘤细胞的生长和分化。既往的 研究表明, 环巴明可显著抑制多种因该信号通路过度激活所致的肿瘤生长,并可诱导 细胞凋亡。 二、研究内容 第一部分 建立大鼠慢性胰腺炎和胰腺癌模型 目的 建立大鼠慢性胰腺炎和胰腺癌模型，动态研究大鼠 CP 病变的形成过程，并 动态观察胰腺癌发生、发展的过程。方法 健康雄性 SD 大鼠 110 只，随机分为 3 组： 正常对照组（n=10）；慢性胰腺炎模型组（n=50）；胰腺癌模型组（n=50）。 建立大鼠 CP 模型：将大鼠置于固定器中，暴露尾静脉，对照组尾静脉注射 100%乙醇和甘油配 制成的有机溶剂（1ml/kg），模型组尾静脉注射二丁基二氯基锡（dinbutyltin dichloride， DBTC）溶液（8mg/ml/kg）。建立大鼠 PC 模型：3%戊巴比妥钠 1.5 ml/kg 体重腹腔内 注入麻醉，经上腹正中切口进腹，暴露胰腺后，于体尾部切开胰腺被膜及部分实质， 深 1mm ，模型组置入 9mg DMBA ，缝合胰腺被膜后关腹。 对照组除不置 DMBA 外， 其余同模型组。通过 HE 染色了解组织学改变，Sirius Red 染色后应用图像定量分析 系统测定胶原含量 。 结果 CP 模型组大鼠发生慢性胰腺炎 34 只(73.9%) ，HE 染 色显示第 6 周出现不同程度的腺泡坏死、萎缩，淋巴细胞、单核细胞浸润，小叶内或 小叶周围纤维化形成，伴胰管改变。 Sirius Red 染色，CP 模型组胶原沉积在导管周 围至小叶内和小叶周围，对照组仅见血管壁胶原沉积，CP 模型组胶原含量显著高于 对照组，差异有统计学意义 (P＜0.05) 。PC 模型组大鼠发生胰腺导管癌 23 只 (57.5%) ，对照组胰腺组织均无明显病理变化。镜下细胞呈腺管样分布，腺腔大小不 一，核异型明显，细胞核增大，核浆比例增加。核大小、形态、染色不一，病理性核 分裂象多见，其内可见胰腺结构完全消失。 结论 本部分成功构建了大鼠 CP、PC 模型，由胰腺病理改变证实造模成功。本研究动 态展示了大鼠 CP 病变的形成过程，由胰腺组织病理学改变的一些指标，如腺泡萎缩、 纤维化、炎症细胞浸润等证实造模成功。我们可以获得新鲜的、不同时期的大鼠胰腺 癌组织标本，使动态观察胰腺癌发生、发展的过程成为可能。 第二部分 Hedgehog 信号通路蛋白在慢性胰腺炎、胰腺癌组织中的表达 目的