罗格列酮对糖尿病大鼠肾保护机制的研究-内科学 肾脏病学专业毕业论文.docxVIP

郑州大学2005屑硕士学位论文 郑州大学2005屑硕士学位论文 罗格列酮对糖尿病人鼠肾保护机制的研究 罗格列酮对糖尿病大鼠肾保护机制的研究 研究生 牛红心 导师 刘章锁 摘要 背景与目的：糖尿病’肾病(DN)是糖尿病微血管并发症，是糖尿病病人主 要致死原因之一，早期以肾小球肥大，系膜扩张，基底膜增厚，肾小球高滤过为 特征，最终导致肾小球硬化。它涉及多种因素和多种机制，如血流动力学因素， 非酶糖化，血管活性物质，细胞因子，生长因予等。最近研究发现过氧化物酶体 增殖物激活受体(PPAR)Y是在糖尿病肾病分子机制中起重要作用的核受体和转 录因子，被其特异性配体激活后发生构象变化，并向核内移行，与目的基因上游 启动子区域的过氧化物酶体增殖物反应元件(PPRE)结合而发挥转录调节作用， 调控多种靶基因的表达。噻哗烷二酮类药物(TZDs)是PPAR7高选择性的外源 性配体。TZDs通过提高外周组织胰岛素敏感性而起降糖作用，普遍用于2型糖 尿病治疗。其中罗格列酮(商品名为文迪贬)已被美国食品与药品管理局批准上 市。该药是作用最强的噻唑烷二酮类药物，且无明显毒副作用。实验表明罗格列 酮可以明显减轻Zuker肥胖大鼠的蛋白尿水平以及肾脏组织的损伤，说明该药有 肾脏保护作用，但其具体机制不明。本实验采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖 尿病模型，通过罗格列酮干预以及生化、免疫组织化学和分子生物学等一系列检 测，探讨罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制，为其在糖尿病肾病方面 的临床应用提供理论依据。 方法：雄性Wistar大鼠，随机选取6只作为正常对照组(C组)，腹腔注射 无菌柠檬酸缓冲液；其余禁食10小时后，单次腹腔注射60mg／kgSTZ(用O．1mol／L 无菌柠檬酸缓冲液新鲜配制，pH4．61，72h后取尾静脉血测血糖，尿糖试纸测尿 糖。血糖=16．7mmol／l，并且尿糖(+++～++++)者入选糖尿病大鼠模型，随 郑州大学2005届硕士学位论文 郑州大学2005届硕士学位论文 罗格列酮对糖尿病大鼠肾保护机制的研究 机分为糖尿病组(DM组)和罗格列酮干预组(R组)。实验期间自由饮食，不给 予胰岛素。R组6只，给予罗格列酮5mg·kg-1．d4混悬液灌胃。DM组6只，每天 同体积生理盐水灌胃。c组6只，每天同体积生理盐水灌胃。模型建立8周末， 留取24小时尿，测体重，然后处死动物，取血，用作生化指标的检测；取肾， 称‘肾重，进行肾组织病理学检查，以及免疫组化、RT-PCR和Western blot方法 检测肾组织中PPAR Y、TGF-B 1、PCNA表达。利用SPSS 10．0软件进行统计学 分析，显著性水准为O．05。 结果： 1．物理和生化指标改变：与c组相比，DM组及R组大鼠血糖、24小时蛋白 尿定量均明显升高(PO．01)，肌酐清除率无明显变化。与DM组相比，R组 大鼠24小时尿蛋白定量明显降低(P0．05)，血糖无明显变化。与C组相比， DM组大鼠肾脏重量增大，R组肾重小于DM组并大于c组，但无统计学意 义。 2．大鼠肾组织的病理学改变：光镜下可见DM组及R组部分l肾小球体积增大， C组未见异常。 3．免疫组化染色：①与c组相比，DM组及R组PPARy表达增加(P0．01)， 但R组PPAR，／表达显著低于DM组(P0．05)。②与c组相比，DM组及R 组TGF．B1表达增加(P0．01)，但R组TGF．131表达显著低于DM组(P0．05)。 ③与C组相比，DM组及R组PCNA染色阳性细胞数均增多(P0．05)，但R 组PCNA染色阳性细胞数显著低于DM组(P0．05)。 4．RT-PCR： C组PPAR^r mRNA及TGF—B1 mRNA有少量基础表达，与C组相 比，DM组及R组PPARymRNA及TGF．13lmRNA表达均增加(P0．01)，但 R组PPARYmRNA及TGF一13l mRNA表达显著低于DM组(P(O．05)。 5．Western blot：DM组及R组大鼠肾组织PPARy蛋白表达变化趋势与PPARy mRNA表达相一致。 结论：罗格列酮能明显减少链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型尿蛋白，对 糖尿病大鼠模型有直接的肾脏保护作用，其机制可能是通过活化PPAR Y，下调 TGF．t3 1，抑制细胞增殖和细胞外基质合成，以及改善。肾间质纤维化，而不依赖 于其降血糖作用。 II 郑州大学2005届硕士学位论文 郑州大学2005届硕士学位论文 罗格列酮对糖尿病人鼠肾保护机制的研究 关键词：糖尿病肾病；噻唑烷二酮；过氧化物酶体增殖物激活受体；转化 生长因子13；增殖细胞核抗原 llI 郑州人学2005届硕士学位论文 郑州人学2005届硕士学位论文