抗氧化剂与内毒素对脐血粒细胞生长的拮抗作用-儿科专业毕业论文.docxVIP

华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 硕士研究生学位论文 抗氧化剂与内毒素对脐血粒细胞 生长的拮抗作用 华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科 研究生 刘亚兰 导师 夏传雄郑孝清 中 文摘 要 目的探讨内毒素刺激脐血产生炎性介质对粒细胞生长的影响，以 及炎症过程中抗氧化剂的拮抗作用。 方法体外肝素化脐血加不同浓度脂多糖(LPS)模拟不同程度的内 毒素血症，并用抗氧化剂N_乙酰半胱氨酸(NAC)干预，即A组：对照组LPS ong／稍，B组：LPSlOng／ml，C组：LPSIOOn∥mt，D组：LPSlOOOnoUmt，E 组：NAC lOmM孵育30min+LPSlOOOng／ml。每组三份。采用鲁米诺l增强 化学发光法检测活性氧(ROS)，放射性免疫技术检测肿瘤坏死因子一n(TNF— Q)，Western blot法检测粒细胞核因子．K B(NF．K B)的表达，采用粒细胞集 落(CFU．G)形成评价粒细胞的生长和流式细胞术评价粒细胞的凋亡和坏 死。 结果(1)ROS：各实验组均在8．12rain化学发光强度达峰值，随后缓 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 硕士研究生学位论文 慢降低，趋于平台水平，而A组化学发光强度较稳定。B、c、D组ROS水 平明显高于A组，E组也高于A组，但与D组相比则有明显降低(po．05)。 (2)TNF-d：A组TNF-Ⅱ水平为1．71±0．3ng／ral，B、C、D组各时间点水 平均增加。D组12h的水平达到13．12±0．71 rig／m1，24h为9。63±0．5 rig／m1 仍高于A组。E组各时问点与D组相比有降低(p0．05)，下降幅度大概为30 一40％，但其水平仍高于A组(pO．05)。(3)NF．K B的表达：LPS影响粒细 胞NF—KBp65蛋白的激活，A_-tllp65在胞浆中明显表达，B、C、D组胞核中 表达增加，胞浆中少表达。NAC预处理可部分抑制粒细胞NF．K B蛋白的激 活。(4)CFU-G：A组CFU—G数目为45±4个，B、C、D组CFU-G数目分别为 36±5，15±5，10±3个，与A组相比都明显减少(po．05)。E组CFU-G数目 为364-5个，与D组相比明显增加(po．05)。(5)粒细胞凋亡率和坏死率：A 组脐血粒细胞体外24h凋亡率达(26．57±2．0)％，坏死率仅为(1．76±0．78) ％，B、C、D组凋亡率明显降低，坏死率明显增高(Do．05)。与D组相比， E组粒细胞凋亡率增加为(22．36±2．24)％、坏死率减少为(1．84±0．21) ％(p0．05)。 结论LPS刺激脐血介导炎性介质ROS和TNF-a产生水平改变，激活 粒细胞NF．K B蛋白的表达，可抑制粒细胞生长和凋亡，增加粒细胞坏死， 并且作用与LPS浓度相关，在感染免疫损伤中起着重要作用。抗氧化剂NAC 可部分减少炎性介质的水平和降低粒细胞的坏死率，对机体是有益的。 关键词 脐血：内毒素；炎性介质；粒细胞； 抗氧化剂 2 兰!翌垫茎堂璺堡垦竺堕 兰!翌垫茎堂璺堡垦竺堕 翌主型壅竺兰垡笙奎 Antioxidant Regulates Granulocytes Growth in Cord Blood Modulated by Endotoxin Abstract Department ofPediatrics，Union HospitaI，]-on西i Medical College， Huazhong University ofScience and Technology Postgraduate Liu Yalan Tutors Xia Chuanxiong；Zheng Xiaoqing Objective To investigate changes and mechanisms ofneonatal infection and to explain the regulative effects ofantioxidant during the inflammation． Methods啪llS concentrations ofLPS are added to of samples heparinized cord blood in vitro，to nlimic endotoxemia．And apply antioxidant NAC to regulate inflammatory processes．Group A control group(LP