马鲛鱼加工副产物酶促水解制备铁结合肽的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 中图分类号 学校代码 10356 UDC 密级 公开 硕 士 学 位 论 文 MASTER DISSERTATION 马鲛鱼加工副产物酶促水解制备 铁结 合肽 的研究 Preparation of iron binding peptides from mackerel processing by-products by enzymatic hydrolysis 作 者 王攀峰 导 师 黄光荣 教授 申请学位 理学硕士 培养单位 中国计量学院 学科专业 生物化学与分子生物学 研究方向 生物活性肽分离纯化 二〇一四年六月 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 中 国计量学院 或其他教育机构的 学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 中 国 计量学 院 有关保留、使用学位论文的 规定。特授权 中 国 计量 学院 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借 阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论 文在解密后适用本授权说明） 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 致 谢 研究生三年的时光已经接近尾声，感谢中国计量学院，感谢生命科学学院， 感谢生物化学与分子生物学专业，让我遇到我的研究生导师黄光荣教授，黄老 师渊博的学识，缜密的思维，严谨的治学态度，对待科研教育认真负责的精神 使我受益匪浅，受用终身，很荣幸能够和黄老师成为师生。在此对黄光荣教授 致以衷心的感谢，愿恩师身体健康、万事如意。 感谢生命科学学院的各位领导和老师的指导和关心，感谢潘家荣老师，陈 文伟老师、贾振宝老师在学习和生活上给予的指导和帮助；感谢赵静师姐，张 墨楠师姐、郑敏、洪瑶、雷鸣、黄迅辰师弟、苏东洋师弟，张驰师弟、梁思正 师弟。你们的存在使我的研究生生涯过的非常的充实。 同时要特别感谢我的父母，姐姐和朋友，有你们的支持和理解，我才能顺 利的完成学业。 最后，向所有曾经给我过我帮助、支持和关心的老师、朋友、家人致以最 诚挚的谢意！ 王攀峰 2014 年 6 月 马鲛鱼加工副产物酶促水解制备铁结合肽的研究 摘要：铁作为必需微量元素之一在人体中起着非常重要的作用。但是由于铁在 食品中存在的形式使得其不容易被机体吸收，而人体中的小肽和低聚肽转运系 统的存在使得铁和肽的结合物非常容易被机体吸收。浙江是一个沿海省份，具 有丰富的渔业资源。马鲛鱼作为高产低值海洋鱼类的一种，富含蛋白含质和高 度不饱和脂肪酸，主要用来加工鱼油，加工副产物则主要加工成饲料，没有得 到高附加值利用。本课题以马鲛鱼加工副产物为原料通过酶解的方法得到了具 有铁结合能力的小肽，并对小肽进行分离纯化与序列鉴定。 首先对马鲛鱼副产物进行脱脂处理，然后选用五种蛋白酶（碱性蛋白酶、 胰蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶以及风味蛋白酶）对其进行酶促水解制备 铁结合能力肽进行研究，结果发现经碱性蛋白酶水解产物具有较高的水解度和 铁结合能力。再以碱性蛋白酶为研究对象，对酶促水解的影响因素（pH、温度、 时间、加酶量）进行单因素试验并确定了中心点：pH8.0，温度 50℃，酶解 3h， 加酶量 7500U。在此基础上分别以铁结合能力和 DPPH 自由基清除率为指标进 行响应面优化设计，得到结果：制备铁结合活性酶解液最佳酶解条件为 pH8.0， 温度 50℃，加酶量 7142U/ml，时间 2h，模型预测定此条件下亚铁结合能力为 20.21mg-EDTA/g-protein，验证实际铁结合能力为 20.15 mg-EDTA/g-protein，此 时 DPPH 清除率达 49.75%；DPPH 清除率最高时的各个因素的最佳酶解条件为： pH7.8，温度 50℃，加酶量 7163U/ml，时间 2.34h，模型预测定此条件下 DPPH 清除率为 50.22%，实际测得 DPPH 清除率为 49.93%、铁结合能力为 19.80 mg-EDTA/g-protein。 由 于 以 铁 结 合 能 力 为 指 标 优 化 后 的 最 佳 酶 解 条 件 与 以 DPPH 清除率为指标优化后的酶解条件结果比较相近，而且在铁结合能力最强 时 DPPH 清除率达到了 49.75%，与最优酶解条件下的 DPPH 清除率相差不大。 因此最终选择 pH8