棉花GhSERKs基因的克隆及表达分析-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

I I 棉花 GhSERKs 基因的克隆及表达分析 摘 要 体细胞胚胎发生是在外界诱导的条件下，体细胞发生一系列的形态和生化改变形成体细胞胚的 过程。体细胞胚胎发生的基础是高等植物特有的细胞全能性，不同于合子胚，体细胞胚胎很容易操 控，培养条件也可控制。有些植物通过组培形成再生植株易且时间短，如水稻，烟草等；而有些植 物通过组培形成再生植株难且时间长，如棉花。如果能够通过利用体胚发生相关基因，来提高植株 的再生率和遗传转化率，缩短组培时间，那将能突破低转化再生率植物的组培瓶颈，于是克隆 GhSERK 家族基因并了解其表达模式显得极为重要。本论文由此开展如下工作： 1. 通过电子克隆和 RACE 技术，从棉花中克隆了四个 GhSERK 基因，GhSERK3 的 ORF 为 1863 bp 编码 620 个氨基酸，分子量为 68574.3 Da； GhSERK4 的 ORF 为 1836 bp 编码 611 个氨基酸，分 子量为 67721.5 Da；GhSERK5 的 ORF 为 1833 bp 编码 610 个氨基酸，分子量为 67608.2 Da；GhSERKL1 的 ORF 为 1791 bp 编码 596 个氨基酸，分子量为 66033.8 Da，且该基因存在可变剪接现象。 2. 生物信息学分析表明它们都是带负电荷、水溶性、半衰期＞10 的稳定蛋白；4 个基因都具有 信号肽；均为膜蛋白；GhSERK3、GhSERK4 和 GhSERK5 均为单次跨膜，且具有植物类受体蛋白激 酶的典型结构，即胞外结构域、单次跨膜域和胞内激酶结构域，而 GhSERKL1 跨膜两次；这些基因 普遍含有富含亮氨酸重复序列，蛋白激酶 ATP 结合位点，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性位点，富脯氨 酸区，蛋白激酶结构域，属植物体细胞胚胎发生受体类蛋白激酶。聚类分析表明 GhSERK1 属于拟南 芥的 SERK1/2 亚家族，而 GhSERK3、 GhSERK4、 GhSERK5 和 GhSERKL1 属于拟南芥的 SERK3/4/5 亚家族。 3. 表达谱分析表明这些基因在不同胚珠和不同愈伤中均能表达，且在第三天和第六天的胚珠中 表达量几乎无变化，在第九天胚珠时，GhSERK1、GhSERK3、GhSERK4 和 GhSERK5 表达量远高于 第三天的表达量，而 GhSERKL1 在胚珠第十二天表达量最高。GhSERK1 在胚性愈伤中的表达量远高 于非胚性愈伤，GhSERK3、GhSERK5 和 GhSERKL1 在胚性愈伤和非胚性愈伤中表达量几乎无差别， 而 GhSERK4 在非胚性愈伤中的的表达量高于胚性愈伤。据上述结果推测 GhSERK1、 GhSERK3、 GhSERK4 和 GhSERK5 在球形胚中高效表达，而 GhSERKL1 在幼胚进入心形期时高效表达；GhSERK1 可能参与体细胞胚的发生过程，GhSERK3、GhSERK5 和 GhSERKL1 可能不参与体细胞胚的发生过程； 而 GhSERK4 可能在非胚性中起重要作用。 综上所述，本研究从棉花中克隆了 GhSERK 家族基因，分析了这些基因在不同胚珠和不同愈伤 中的表达情况。为 GhSERKs 在棉花体胚发生中的应用奠定基础，同时也为进一步研究 GhSERKs 在 棉花体胚发生和合子胚发育过程中的功能奠定基础。 关键词：棉花；SERK 基因；生物信息学；胚珠；愈伤组织；表达分析 II II The Cloning and Expression Analysis of GhSERKs Gene from Cotton (Gossypium hirsutum L.) Abstract Somatic embryogenesis conditions induced by the External conditions,the somatic cells of morphological and biochemical changes in the process of the formation of somatic embryos.Somatic embryogenesis is based on the pluripotency of the cells of higher plants,unlike zygotic embryos,somatic embryogenesis is very easily manipulated and controlled culture conditions.Some plants through tissue culture to form a regenerated plants in a short time,such as rice,