棉花PsbP启动子的功能研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

I I 棉花 PsbP 启动子的功能分析 摘 要 基因表达和调控是植物基因工程研究的重要内容，而启动子在决定基因表达方面 起着转录调控中心的作用，它在很大程度上决定着目的基因表达的时间、空间和强度。 目前在商业化转基因作物中使用的启动子往往都是组成型启动子，该类型启动子驱动 外源基因持续、稳定的表达往往造成能量的非必要浪费，增加植株的代谢负担，同时， 组成型表达外源基因还可能具有一定的潜在副作用。因此，用特异性启动子取代组成 型启动子，使外源基因能够定时、定点、定量地在植物中表达是植株基因工程研究的 重要内容。 PsbP是叶绿体光系统Ⅱ中放氧复合体的外周蛋白，是保证PSⅡ功能完整性不可缺 少的组成部分，在水裂解过程中起着维持Ca2+浓度的作用。本文克隆了棉花GhPsbP基 因的cDNA全长及启动子，对全长启动子5端进行了6个缺失突变，并分别构建了7个融 合GUS基因的表达载体转化烟草。对不同转基因烟草株系进行组织化学定位及表达分 析，证明了该启动子为绿色组织特异表达启动子，确定了其结构和功能。该启动子的 核心区域为-1~-97bp，该段序列即可驱动GUS基因在烟草的叶片中特异表达；分离了该 启动子中控制茎及成熟叶片特异表达区域-508~-670bp之间的162bp的重要区段，其中出 现频率较高的5-TTTTA-3和5-TATAAAT-3基序可能是潜在的正调控元件，也可能与成 熟叶片和茎杆中的特异表达相关；-1055~-2077bp区段分布着增强子元件，2077bp片段 启动子的效率是核心启动子的5倍，启动子全长序列较之缺失突变体的表达效率最高。 构建了棉花GhPsbP全长启动子驱动CP4 epsps基因的植物表达载体，转化烟草获得 32株转基因植株，分析了epsps在转基因植株中的表达情况，结果表明：GhPsbP可以驱 动功能基因CP4 epsps在烟草的绿色组织特异表达，其在茎叶绿色组织中的表达量足以 抵抗工作浓度草甘膦的毒害。获得了抗性较强的转基因烟草株系，为今后开展抗草甘 膦转基因工作选择适宜的基因材料及表达调控元件提供了有力的理论基础和实验依 据，也为绿色组织特异性启动子的研究及应用奠定了一定的基础。 关键词：组织特异表达；GUS；缺失分析；转基因烟草；组织化学定位；顺式作用元 件；草甘膦抗性 II II Functional Analysis of Cotton PsbP Promoter Abstract Gene expression and regulation is an important part of plant genetic engineering, moreover, the promoter play an central role of transcriptional regulation, which largely determines gene expression in time, space and intensity. Currently, constitutive promoter is widely used in commercial transgenic crops, and foreign gene driven by them can express constantly and stably throughout all tissues of plant at every developmental stage, at a high metabolic expense to host plant. Meanwhile, excessively expression of foreign gene may also have some potential harmful effects. Thus, utilization of specific promoter, replacing the constitutive promoter, in order to drive foreign gene expression in certain time, place and intensity, is a significant part of plant genetic engineering. PsbP is a peripheral protein of oxygen-evolving complex in the chloroplast photosystem II , which is a indispensable component to ensure the functional integrity of PS II,and whose essentia