马铃薯纺锤块茎类病毒内蒙古分离株基因序列分析及侵染性克隆的构建-植物病理学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Sequence analysis and construction of infectious clone of potato spindle tuber viroid-Inner Mongolia isolate Thesis submitted to Qingdao Agricultural University In Fulfillment of the Requirement for the Degree of Master of Agronomy Wang Jian (College of Agronomy and Plant Protection) Supervisor: Associate Prof. Chi Shengqi Qingdao.China June.2015 万方数据 万方数据 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 青岛农业 青岛农业大学硕士学位论文 摘要 青岛农业 青岛农业大学硕士学位论文 Abstract 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 马铃薯纺锤块茎类病毒内蒙古分离株基因序列 分析及侵染性克隆的构建 摘 要 马铃薯纺锤块茎类病毒（potato spindle tuber viroid，PSTVd）是近几年影响马铃薯 生产的重要病原之一，其对马铃薯的产量和品质具有严重的影响，导致马铃薯品种种 性退化和品质下降。感染后马铃薯一般减产 30%左右，严重的能高达 90%。PSTVd 具 有极高的侵染性，可通过农机具、切刀、种薯切块摩擦等方式进行汁液传播，也可通 过介体昆虫、花粉、种子、块茎、水等方式传播。PSTVd 能在马铃薯的任何生育时期 进行侵染，并表现多种症状。 本研究以从内蒙古采集到的受 PSTVd 侵染的病薯为材料，克隆了 PSTVd 的全长 基因，命名为内蒙古分离株（potato spindle tuber viroid-Inner Mongolia，PSTVd-IM）， 对其序列进行了分析，构建了 PSTVd-IM 侵染性克隆，主要取得的研究结果如下： 1.获得了 PSTVd-IM 全长基因，并对其进行了测序的分析。测序结果表明，该序列 大小为 359bp，其与株系 EF044305.1 序列吻合，同源性高达 100%。首次报道了我国 PSTVd-IM 内蒙古分离株。将此内蒙古分离株序列与已公布的 128 个全长的 PSTVd 株 系，应用 Mega5.1 软件构建了系统进化树，确定了该分离物与国内外该类病毒分离物 的亲缘关系，发现该分离物与俄罗斯分离物亲缘关系最近。与已发表的 PSTVd 强株系 （U23058.1）、中间株系（AY937179.1）和弱株系（M14814.1）进行了序列比对和二 级结构分析，发现 PSTVd-IM 与这三个不同致病性株系在中央保守区、致病区和可变 区结构域存在差异，说明这些结构域可能与其致病性相关。 2.构建了 PSTVd-IM 的侵染性克隆。通过对 PSTVd-IM 的序列分析，选取 PSTVd- IM 的单酶切位点 EagI 对 PSTVd-IM 进行等长加倍，实现了 PSTVd-IM 基因组的二倍 化，保证了 PSTVd-IM 起始位点的完整性，为 PSTVd-IM 的有效复制奠定了基础。 PSTVd-IM 的克隆和序列分析为 PSTVd-IM 克隆化载体的构建奠定了坚实的基础。 PSTVd-IM 克隆化载体的构建便于该类病毒接种和突变体的构建，为该类病毒的致病机 制和致病特点的研究奠定了基础。 关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒；PSTVd；侵染性克隆；序列分析 1 Sequence analysis and construction of infectious clone of potato spindle tuber viroid-Inner Mongolia isolate Abstract Potato spindle tuber viroid is one of the important diseases of