罗汉果水提物HPLC指纹图谱的建立及其谱效关系研究-药理学专业毕业论文.docxVIP

罗汉果水提物 HPLC 指纹图谱的构建及其谱效关系研究 中 文 摘 要 目的：本学术论文以葫芦科罗汉果属植物罗汉果[Siraitia grosvenorii (Swingle) C. Jeffrey ex Lu et Z. Y. Zhang]的果实为研究对象，探讨高效液 相色谱（HPLC）指纹图谱所代表的“有效部位群”对药效贡献的大小。 最后通过数据处理，找到罗汉果“化学谱一药效”之间的对应关系，为罗 汉果的质量控制和药效评价标准的制定提供参考。 方法：（1）罗汉果止咳作用研究：以氨水致小鼠咳嗽模型，探讨罗 汉果的止咳作用。（2）罗汉果通便作用研究：通过复方地芬诺酯致便秘 小鼠模型，以小鼠排便潜伏期、排便颗粒数、排便湿重以及小鼠血清中 胃动素(MTL)含量为指标，探讨罗汉果对小鼠的通便作用。（3）罗汉果的 HPLC 指纹图谱的建立：通过 HPLC 分析技术，以国家药典委员会颁布的 中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，建立并评价 25 个不同批次的罗 汉果止咳、通便的 HPLC 指纹图谱。（4）罗汉果谱-效关系模型的构建： 在获得的罗汉果 HPLC 特征峰面积值与罗汉果镇咳作用、通便作用的数 据基础上，对原始数据进行规格化，采用灰关联度和偏最小二乘回归分 析技术，计算参考数列与比较数列的绝对差值以及各特征峰与对氨水致 小鼠咳嗽的镇咳作用和对复方地芬诺所致便秘小鼠排便潜伏期、排便颗 粒数、排便湿重影响的关联度。 结果：（1）罗汉果对氨水致小鼠咳嗽有明显的镇咳作用。（2）罗汉 果对复方地芬诺酯致便秘小鼠能明显缩短便秘小鼠的排便潜伏期、增加 小鼠的排便颗粒数、排便湿重以及增加正常小鼠体内 MTL 含量。增加正 常小鼠小肠含水量。（3）经相似度、精密度、重复性及稳定性等方法考 察，建立的罗汉果药材 HPLC 指纹图谱能全面反映罗汉果甜甙 V 等主要 成分的分布特征。（4）谱效关系结果：①止咳谱效关系：指纹图谱中找 出共有峰 9 个，其中有 8 个共有峰与药效有一定关联（关联度＞0.60）， 其中有 7 个共有峰与止咳药效有显著关联（关联度＞0.8）。在罗汉果提取 物 HPLC 指纹图谱中，1 号峰、2 号峰、3 号峰、5 号峰、6 号峰、8 号峰、 9 号峰所代表的化学成分与罗汉果止咳作用具有高度关联（关联度＞ 0.80），依据关联度的大小，确定各成分（P）对止咳作用贡献大小顺序为 P5＞P2＞P9＞P6＞P3＞P8＞P1＞P4＞P7，其中正相关峰为 3 号峰、4 号 峰、6 号峰、9 号峰；负相关为 1 号峰、2 号峰、5 号峰、7 号峰、8 号峰。 上述结果表明罗汉果提取物的止咳作用是其各个化学成分共同作用的结 果，且各个成分的相关程度不同。②通便作用谱效关系：a 通便作用（潜 伏期）谱效关系：指纹图谱中找出共有峰 9 个，其中有 8 个峰与小鼠排 便颗粒数药效有显著关联（关联度＞0.8）。在罗汉果提取物 HPLC 指纹图 谱中，1 号峰、2 号峰、3 号峰、4 号峰、5 号峰、6 号峰、8 号峰、9 号 峰所代表的化学成分与影响小鼠排便潜伏期作用具有高度关联（关联度 ＞0.80）。依据关联度的大小，确定各成分（P）对延长小鼠排便潜伏期作 用贡献大小顺序为 P5＞P9＞P6＞P2＞P8＞P1＞P3＞P4＞P7。其中正相关 峰为 1 号峰、3 号峰、4 号峰、6 号峰、7 号峰、8 号峰；负相关为 2 号峰、 5 号峰、9 号峰。b 通便作用（颗粒数）谱效关系：指纹图谱中找出共有 峰 9 个，其中有 8 个峰与小鼠排便颗粒数药效有显著关联（关联度＞0.8）。 在罗汉果提取物 HPLC 指纹图谱中，1 号峰、2 号峰、3 号峰、4 号峰、5 号峰、6 号峰、8 号峰、9 号峰所代表的化学成分与罗汉果增加小鼠排便 颗粒数作用具有高度关联（关联度＞0.80），依据关联度的大小，确定各 成分（P）对增加小鼠排便颗粒数作用贡献大小顺序为 P5＞P9＞P6＞P2 ＞P8＞P1＞P3＞P4＞P7。其中正相关峰为 1 号峰、3 号峰、4 号峰、6 号 峰、7 号峰、8 号峰；负相关为 2 号峰、5 号峰、9 号峰。c 通便作用（排 便湿重）谱效关系：指纹图谱中找出共有峰 9 个，其中有 9 个峰与小鼠 排便颗粒数药效有显著关联（关联度＞0.8）。在罗汉果提取物 HPLC 指纹 图谱中，1 号峰、2 号峰、3 号峰、4 号峰、5 号峰、6 号峰、7 号峰、8 号峰、9 号峰所代表的化学成分与增加小鼠排便湿重作用具有高度关联 （关联度＞0.80）。依据关联度的大小，确定各成分（P）对增加小鼠排便 湿重作用贡献大小顺序为 P7＞P6＞P4＞P9＞P5＞P1＞P2＞P8＞P3。其中 正相关峰为 7 号峰、8 号峰、9 号峰；负相关为 1 号峰、2 号峰