慢病毒介导的Angiomotin过表达对骨转移前列腺癌细胞迁移的作用及机制研究-基础医学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于  不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的：研究细胞迁移相关蛋白Angiomotin(Amot)在骨转移前列腺癌细胞PC3-mm2 迁移中的作用及相关机制，为PCa骨转移的防治提供研究基础。 方法：1．利用慢病毒感染包装技术构建Amot稳定过表达细胞PC3mm2-Amot和 阴性对照细胞PC3mm2-CDH；利用细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测 PC3mm2-Amot细胞的迁移能力；2．利用qRT-PCR技术检测PC3mm2-Amot中骨 转移相关基因mRNA的表达变化；构建质粒pIRES2-Amot，同时以pIRES2-EFGP 为 阴 性 对照 ， 分 别瞬 时 转 染 PC3 细 胞 中过 表 达 Amot ， Western blotting 检测 β-catenin 的核内表达。将质粒pIRES2-Amot和pcDNA-β-catenin瞬时转染PC3细胞 中分别过表达Amot和β-catenin，利用免疫共沉淀技术（anti-Cad11抗体免疫共沉 淀 ） 分 别 检 测 免 疫 复 合 物 中 Amot 与 β-catenin 的 表 达 ； 利 用 免 疫 共 沉 淀 技 术 （anti-Amot 抗体免疫共沉淀）检测PC3mm2-Amot细胞中Patj与Amot的结合情 况。 结果：1．成功构建了 Amot 稳定过表达细胞株 PC3mm2-Amot。细胞划痕实验结 果显示，PC3mm2- Amot 细胞在 5 h 和 10 h 内的细胞迁移能力较对照细胞 PC3mm2-CDH 明 显 增 强 （ P0.05 ）， 划 痕 愈 合 率 分 别 为 10.2%±0.6% 和 19.0%±0.8%。Transwell 细胞迁移实验结果显示当 transwell 下室为 10%FBS 的培 养基时，实验组平均每高倍视野（×200）迁移出膜细胞数为对照组的 3.62 倍， 迁移促进率为 263.6%（P0.05）。当 transwell 下室为成骨细胞条件培养基时，实 验组平均每高倍视野（×200）迁移出膜细胞数为对照组的 2.46 倍，迁移促进率 为 146.2%（P0.05）。当 transwell 下室为成骨细胞共培养时，实验组平均每高倍 视野（×200）迁移出膜细胞数为对照组的 1.98 倍，迁移促进率为 97.96%（P0.05）。 2．qRT-PCR 结果表明，与 PC3mm2-CDH 细胞相比，PC3mm2- Amot 细胞中骨 转移相关基因 COX-2、C3 上调最为显著，而 CXCR4、MCP-1、IL-6、PTHrp 无 明显改变；Western blotting 结果表明 Amot 在 PC3 细胞中的过表达导致 β-catenin 的核内表达增强； anti-Cad11 抗体免疫共沉淀结果显示，在 PC3 细胞中分别过 表达 Amot 或 β-catenin，均会导致 β-catenin 或 Amot 与 Cad11 结合的下降，即 pIRES2-Amot 转染组中 Amot 和 Cad11 结合的蛋白量显著增加，β-catenin 与 Cad11 结合的蛋白量显著减少；pcDNA-β-catenin 转染组中 Amot 和 Cad11 结合的蛋白 I 量显著减少，β-catenin 与 Cad11 结合的蛋白量显著增加。anti-Amot 抗体免疫共 沉淀结果显示并未检测到 Patj 蛋白条带。 结论：1．Amot 过表达可促进骨转移性前列腺癌细胞 PC3-mm2 的迁移。2．在 骨转移性前列腺癌细胞中，Amot 的过表达可导致 β-catenin 核内表达增高，并且 二者对 Cad11 的结合存在相互竞争的关系，同时 Amot 过表达导致 COX-2 和补 体 C3