黄瓜叶绿体特异性表达载体的构建-遗传学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 刘盛海 2015 年 5 月 18 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年) 摘要 摘要 摘要 虽然植物细胞核转基因技术已在世界不同地区得到了应用，并为现代农业 带来了革命性改变，但其难以避免的转基因沉默现象和生物安全问题引发了科 学界及社会大众的广泛担忧，并给基因工程在农业中的广泛使用带来限制。而 叶绿体转化技术因独特的细胞质遗传优势成为植物转基因工程的热点之一。叶 绿体转化法具有生物安全性高、外源基因遗传稳定、高效表达及共转化等优点， 其在生物安全性上的独特优点受到广泛关注，为解决转基因作物的基因逃逸问 题提供了很好的解决方案，真正生物安全的转基因作物有望通过该技术获得。 黄瓜（Cucumis sativus L）属葫芦科植物，本文中选用“津研 4 号”黄瓜品 种作为实验材料。首先，构建黄瓜特异性叶绿体表达载体 pDK53-il6、 pDK53-strail 、pDK53-il6-pC3 和 pDK53-strail-pC3，分离黄瓜叶绿体并用构 建的载体进行离体电转化，通过分子生物学手段鉴定质粒的表达情况。进一步 尝试了原生质体分离与培养及电转化，为最终期待获得转基因黄瓜植株，探索 将黄瓜叶绿体作为新的高效生物反应器的应用，用于生物疫苗及药用蛋白的生 产，拓宽现代农业的应用范围奠定了重要基础。 此外，基于本实验室研究的疏水蛋白HGFI的两性特点，利用核酸与蛋白质 结合的琼脂糖凝胶阻止实验，对HGFI与黄瓜叶绿体特异性表达载体间的作用进 行分析，并构建了叶绿体导肽（TP）与疏水蛋白HGFI的融合表达载体，希望后 续能通过叶绿体导肽的定位及疏水蛋白的包埋特性，探索出一条叶绿体转化的 新方法，以解决叶绿体转化效率的技术难题。 关键词: 黄瓜，叶绿体，表达载体，构建，电转化 I Abst Abstract Abstract Although the nuclear transgenic technology of plants has been applied in different regions of the world, has brought a revolutionary change to modern agriculture, but it is difficult to avoid the causing widespread concerns about the scientific community and the public, and promoting the use of genetic engineering in agriculture is limited. The chloroplast transformation technology because of the unique cytoplasm genetic advantage , become one of the hotspots of plant genetic engineering ; Chloroplast transformation biologically safe, exogenous genetic stability, efficient expression and co-transformation , etc., its unique advantage in bio- security is on the widespread concern , provides a good solution to the problem of “Genes Diffusion”, the genetically modified crops with re