黄荆子木脂类化合物抑制人宫颈癌Hela细胞生长和诱导细胞凋亡的实验研究-肿瘤学专业毕业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 黄荆子木脂类化合物抑制人宫颈癌 Hela 细胞生长和诱导细 胞凋亡的实验研究 中文摘要 目的: 研究黄荆子提取和分级分离的 4 种木脂类化合物(Comp 6、Comp 7、 Comp 8 和 Comp 10)抑制体外培养人宫颈癌 Hela 细胞生长和诱导凋亡作用，并 初步探讨其分子机制。 方法：体外培养人宫颈癌(Hela)细胞，BrdU 掺入法测定细胞核酸合成；平皿集 落形成法和软琼脂培养集落形成法检测细胞生长和集落形成能力；PI 染色流式 细胞术(FCM)分析细胞凋亡率和细胞周期累积百分率；FITC 标记间接免疫荧光 FCM 观察细胞 Mcl-1 蛋白表达。 结果：黄荆子提取和分级分离得到的 4 种木脂类化合物(Comp 6、Comp 7、Comp 8 和 Comp 10)对人宫颈癌 Hela 细胞核酸合成均有抑制作用，以 Comp 8 效价强 度最高，其 BrdU 掺入抑制的 IC50 值为 0.93 μg/mL；约为紫杉醇(Tax，IC50＝ 0.45μg/mL)的 1/2。平皿集落形成法检测数据显示：4 种木脂类化合物以浓度依赖 方式抑制 Hela 细胞生长，其中 Comp 8 的作用最强(IC50＝0.13μg/mL)。软琼脂培 养集落形成法的结果表明：4 种木脂类化合物均具有抑制 Hela 细胞集落形成作 用，呈浓度依赖性，Comp 8 的 IC50 为 0.57μg/mL, 是 4 种木脂类化合物中最小者。 PI 染色 FCM 分析证实：4 种木脂类化合物均能有效诱导 Hela 细胞凋亡和细胞周 期 G1/G0 期阻滞 ， Comp 8 促 进 细 胞 凋 亡 的 EC50 为 22.9μg/mL 与 Tax 的 EC50(31.0μg/mL)接近。间接免疫荧光 FCM 测定发现 Comp 8 显著下调 Hela 细胞 Mcl-1 蛋白表达，呈浓度依赖性。 结论: 1. 黄荆子木脂类化合物具有抑制人宫颈癌 Hela 细胞核酸合成和生长作用。 2. 黄荆子木脂类化合物能有效地诱导人宫颈癌 Hela 细胞凋亡。 3. 黄荆子木脂类化合物(Comp 8)可能通过下调 Hela 细胞 Mcl-1 蛋白表达而抑制 细胞生长和诱导细胞凋亡。 关键词：宫颈癌，黄荆子，黄荆子木脂素，Mcl-1，凋亡 Empirical study on the inhibition of growth and induction of apoptosis in human cervical cancer Hela cells by lignanoids from the acetoacetate extract of Vitex negundo seed Abstract Objective: To investigate the Effects of lignanoids from the acetoacetate extract of Vitex negundo seed (Comp 6,Comp 7,Comp 8 and Comp 10)on the growth and apoptosis of human cervical cancer Hela cells and its mechanism. Methods: Human cervical cancer Hela cell line was cultured in vitro. Nucleic acid synthesis of Hela cells were determined by the incorporation of BrdU. The plate colony formation and the colony formation in soft agar methods wer used to detect the growth of Hela cells. The apoptosis and cell cycle were analyzed by flow cytometry with PI staining. The expression of Mcl-1 protein in Hela cells was observed using indirect immune fluorescence technique with flow cytometry. Results: Four species of lignanoids from the acetoacetate extract of Vitex negundo seed (Comp 6,Comp 7,Comp 8 and Comp 10) all inhibite