磷酸酶活性参与变异链球菌抗氧化应激反应-中国病原生物学杂志.DOC

PAGE PAGE 6 变异链球菌腺苷磷酸硫酸酶的原核表达及功能研究 张加勤，侯香华**，宋秀宇** （厦门大学附属第一医院检验科，厦门，361003，中国） 【摘要】目的 构建变异链球菌aps基因原核表达载体，表达纯化目的蛋白，继而对其生物学功能进行初步鉴定。方法 以变异链球菌UA159株基因组DNA为模板PCR扩增变异链球菌aps基因编码区，插入原核表达载体pASK-IBA43 plus，转化E. Coli Top 10, 无水四环素诱导His-APS蛋白表达，经Ni-NTA纯化后，检测His-APS蛋白腺苷磷酸硫酸酶活性及核糖核酸酶活性。结果 PCR扩增出933bp的aps基因开放读码框，成功构建aps基因原核表达载体pASK-aps，并在E. Coli Top 10诱导表达，SDS检测重组His-APS蛋白分子量为38KDa，该蛋白在Mg2+及Mn2+存在的条件下能水解pAp，且呈时间及浓度依赖性，不能降解Cy5标记的随机6nt寡核苷酸探针。结论 重组His-APS蛋白具有腺苷磷酸硫酸酶活性，呈时间及浓度依赖性，不具有核糖核酸酶活性，为进一步研究aps基因功能提供依据。 【关键字】变异链球菌；腺苷磷酸硫酸酶；核糖核酸酶 Study on the Purification and bio-functions OF pAp Phosphatase of Streptoc