棉花乙烯合成关键基因参与细胞伸长发育的功能分析-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

I I 中文摘要 乙烯（ethylene）是一种植物激素，在植物整个生命周期中起着至关重要的作用， 它对植物的生长发育过程如种子萌发、果实成熟、叶片衰老、器官脱落及响应胁迫反应 等有广泛的影响。1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶（ACO）基因是乙烯合成途径中的最后一 个关键酶，也称为乙烯形成酶（EFE），许多研究表明，其对于细胞内乙烯的合成起到重 要的调控作用，并可以通过促进乙烯产生增强植物耐受胁迫条件的能力。 近些年许多的 ACC 氧化酶（ACO）不断地从不同植物中克隆出来，其表达模式也 得到广泛的研究，利用转基因的方法获得的反义植株表现出明显的抑制乙烯合成的特 性。棉花是世界性的重要的经济作物，稳定和提高棉花质量，成为提高我国纺织品国际 市场竞争力的重要内容。本文从陆地棉中克隆了 ACO 基因（ACO1、ACO2 和 ACO3）， 并对其进行了序列比对，生理性状和功能分析。具体结果如下： 1、通过 PCR 反应，从棉花纤维组织 cDNA 中分别扩增得到 GhACO1 基因，大小为 960bp 的特异性片段；GhACO2 基因，大小为 960bp 的特异性片段；GhACO3 基因，大小为 954bp 的特异性片段。测序结果与来自拟南芥、烟草、大豆、绿豆、苹果、黄瓜的 ACO 基因 有较高的同源性。 2、构建植物表达载体 p35S::GhACO1、p35S::GhACO2 和 p35S::GhACO3，采用花序浸 染法转化拟南芥；用叶盘法转化烟草，卡那霉素筛选转基因植株。获得转基因拟南芥纯 合体植株和转基因烟草。 3、GUS 组织化学分析检测，结果表明，在转基因拟南芥叶片中有很强的 GUS 活性，茎 和根有微量表达。 4、通过对转基因拟南芥 T2 代植株和烟草阳性植株不定根生长发育情况的统计显示，转 GhACO 基因的植株的不定根数目要明显多于野生型植株。 5、利用 NaCl 和 PEG6000 对转基因拟南芥 T2 代植株进行盐胁迫和干旱胁迫处理，进行 相关生理指标检测，结果显示，与野生型拟南芥相比，转 GhACO 基因拟南芥对盐胁迫 和干旱胁迫的耐受性显著性增强。 6、通过低温和高温对转基因拟南芥 T2 代植株进行处理，进行相关生理指标检测，结果 显示，与野生型拟南芥相比，转 GhACO 基因拟南芥对低温胁迫和高温胁迫的耐受性显 著性增强。 关键词： 棉花；乙烯；ACC 氧化酶；GUS；不定根；逆境胁迫 II II Abstract Ethylene, as a plant hormone, playing a vital role throughout the life cycle of the plant, are widely effects in plant growth and development, such as seed germination, fruit ripening, leaf senescence, organ loss and response to stress reactions, etc. 1-aminocyclopropane-1 -carboxylic acid oxidase (ACO) gene, known as the ethylene forming enzyme (EFE), is the key enzyme in the last step of ethylene biosynthesis. Many studies ha ve shown that the synthesis of ethylene within the cell play important regulatory role and is enhanced by promoting ethylene production capacity of plant stress tolerance. In recent years, a number of ACC oxidase (ACO) are continuously cloned from different plants, and the expression patterns have also been extensively studied, transgenic antisense plants showed significant inhibition of ethylene synthesis. Cotton is an important economic crop worldwide, stabilizing and improving the quality of cotton fiber ha