米曲霉组合制曲及紫外诱变提高产氨肽酶活性及应用-生物工程专业毕业论文.docxVIP

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PAGE IV万方数据 PAGE IV 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集 体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均 已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者:  日期: 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门 或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学 可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印 或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文 或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。 保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者: 摘要 摘要 摘要 氨肽酶(aminopeptidase)是自然界中普遍存在的重要的蛋白酶类的一种, 能够催化肽链氨基末端肽键进行水解。其中,有些氨肽酶不仅能够水解多肽,还 能水解完整的蛋白酶。由于肽段呈苦味的部分原因是由于肽链 N 末端的碱性氨 基酸的存在,所以氨肽酶具有很强的脱苦能力。 本论文通过对两株米曲霉菌株进行组合制曲培养,以中性蛋白酶、氨肽酶为 指标,得到制曲时间短、制曲中性蛋白酶和氨肽酶活性高的组合比例。并将两株 米曲霉菌株按合适比例进行组合制曲培养,检测中性蛋白酶和氨肽酶活力。在 pH7.2、30℃条件下对单菌株进行制曲培养,CICC2339 和 CICC2066 菌株中性蛋 白酶活力在 42 h 分别达到 1187.7 U/g 和 830.8 U/g,其氨肽酶活力分别在 42 h 和 60 h 达到最高值 93.2 U/mL 和 201.4 U/mL,最优组合菌株 A6B4 制曲 42 h 中性蛋 白酶和氨肽酶活力最高分别达到 1366.8 U/g 和 148.7 U/mL,其中性蛋白酶和氨 肽酶活力都较单菌株制曲具有优势。两株米曲霉菌株组合制曲能够缩短制曲时间, 提高中性蛋白酶和氨肽酶活力,这些研究结果为米曲霉在食品发酵上的进一步了 解提供帮助。 以提高米曲霉产氨肽酶活性为目的,将 CICC2066 菌株作为出发菌株进行紫 外诱变,经过多次筛选后得到三株氨肽酶活力显著提高且遗传性较稳定的诱变株 UY-15、UY-17 和 UY-20。将三株诱变株与出发菌株进行发酵实验性能比较,结 果表明,米曲霉 UY-15、UY-17 和 UY-20 培养 42h 后制曲中氨肽酶活力分别是出 发菌株的 1.24、1.38 和 1.54 倍,且 UY-20 中性蛋白酶活力较出发菌株提高了 7%。 三株诱变株的孢子量较出发菌株具有优势。通过对 CICC2066、CICC2339、UY-15、 UY-17、UY-20 和 A6B4 等六组发酵酱油样品进行游离氨基酸检测分析,分别考察 样品中游离氨基酸总量、组成和呈味。结果显示:UY-20 游离氨基酸总量最高, 且 UY-15、UY-17 和 A6B4 氨基酸量均高于 CICC2066、CICC2339;在游离氨基 酸的组成方面,呈鲜味的天冬氨酸和谷氨酸所占比例最高;UY-20 和 A6B4 发酵 酱油中呈甜味氨基酸含量均高于其他四组样品。 关键词:米曲霉;氨肽酶;组合培养;紫外诱变;游离氨基酸 Abstract Abstract Abstract Aminopeptidase, a collection of enzymes which can remove amino acid from the N-terminus of peptides one by one, is a kind of important protein enzymes in nature. Some aminopeptidase not only can hydrolyzed peptides, also can hydrolyzed protease. The reason of poeptides having bitter is because of the basic amino acid at the end of N-terminus, and the aminopeptidase has ability of removing bitter. The purpose in the paper is to shorten koji making time and increase activity of neutral proteas

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