课件：蛋白质的结构与功能.ppt

一、蛋白质具有两性电离的性质 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 颗粒表面电荷 水化膜 蛋白质胶体稳定的因素: + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 三、蛋白质空间结构破坏而引起变性 在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。 蛋白质的变性(denaturation) 变性的本质: ——破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。 应用举例: 临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。 此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 四、蛋白质在紫外光谱区有特征性吸收峰 由于-------------这两种氨基酸的存在 ,因此蛋白质在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质溶液含量 茚三酮反应(ninhydrin reaction) 双缩脲反应(biuret reaction) 第五节 蛋白质的分离纯化与结构分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein * 透析(dialysis)： 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 （三）电泳 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 （四）层析 层析(chromatography)分离蛋白质的原理 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。 蛋白质分离常用的层析方法 * 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 * 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。 目 录 目 录 三、多肽链中氨基酸序列分析 分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成 测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基 把肽链水解成片段，分别进行分析 测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法 一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。 通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列 按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列 分离编码蛋白质的基因 测定DNA序列 排列出mRNA序列 章末小结 名词类： 1.蛋白质 2.谷胱甘肽 3. 分子伴侣 4.亚基 5.蛋白质的1-4级结构的概念 6.蛋白质的变性和复性 需要重点掌握的知识点： 1.肽键的形成方式及构成肽平面的六个原子。 2.20种氨基酸的分类、名称、三字符号 3.蛋白质的一、二、三、四级结构的维持空间结构稳定的价键。举例说明高级结构的表现形式。 4.从分子水平阐述镰刀形细胞贫血症的致病原因。 5.简述血红蛋白的携氧机制。 6.了解蛋白质的两性、紫外吸收、显色反应，熟悉电泳的原理。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 （三）?-折叠 （四）?-转角和无规卷曲在蛋白质分子中普遍存在 ?-转角 无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。 （五）模体是