课件：核苷酸代谢与遗传信息的表达.ppt

（二）基因工程的基本过程 1.目的基因的制备 方法：基因组DNA文库、制备cDNA文库 PCR、化学合成 2.选择载体：?外源DNA片段离开染色体是不能复制的。如果将外源DNA连接到复制子上，外源DNA则可做为复制子的一部分在受体细胞中复制。这种复制子就是载体。常用载体有质粒、噬菌体DNA、柯斯质粒载体和动物病毒载体等。 3.目的基因和载体连接：把目的基因和载体基因通过DNA连接酶共价连接成一个完整的重组体分子，即DNA分子的体外重组。 4.重组DNA导入受体细胞：外源DNA（含目的DNA）与载体在体外连接成重组DNA分子（嵌合DNA）后，需将其导入受体细胞。随着受体细胞的生长、增殖，重组DNA分子也复制、扩增，这一过程即为无性繁殖 。 5.重组体的筛选：重组体DNA分子被导入受体细胞，经适当涂布的培养板培养得到大量菌落或菌斑。筛选就是将带有目的基因的菌落鉴定、提取。 6.目的基因表达：是指经过转录和翻译合成蛋白质的过程。如胰岛素，干扰素；生产疫苗的抗原和特异的抗体等。 三、常用分子生物学的实验技术 （一）探针技术 1、探针（probe)：以研究和诊断为目的，用于检测特定核酸序列的已知DNA或RNA片段 2、探针技术：利用分子杂交的基本原理：把已知的核酸探针和待测的DNA分子进行杂交，按照碱基互补配对的原则，能够和探针的互补序列由于标记被检出，并