课件：蛋白质的构件氨基酸.ppt

层析法的基本原理 层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。 （一）基于分配系数差异的分离方法—分配层析法 分配系数 Kd= CA CB CA：一种物质在A相（流动相）中的浓度 CB：一种物质在B相（固定相）中的浓度 原理：主要根据被分析的样品（如aa混合物）在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的目的。 固定相和流动相 混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在两相中的分配情况。 1、柱层析 层析柱中的填充剂或支持剂表面附着一层结合水作为固定相，沿固定相流过的与它互不相溶的溶剂是流动相。当用洗脱剂洗脱时，柱上端的氨基酸混合物在两相之间会按不同的分配系数以不同的速度向下移动。分步收集层析柱下端的洗脱液，然后分别用茚三酮显色定量，以氨基酸量对洗脱液体积作图得洗脱曲线，曲线中的每个峰相当于某一种氨基酸。 加洗脱剂 氨基酸样品 支持剂 层析柱 分部收集 1.0 0.5 0.1 光吸收值 20 40 60 80 100 120 流出液（毫升） 2、纸层析 固定相：滤纸纤维素上吸附的水