梅花参岩藻聚糖硫酸酯的提取制备工艺及质量控制研究-中药专业毕业论文.docxVIP

广东药学院硕士研究生学位论文 广东药学院硕士研究生学位论文 目 录 摘 要 1 Abstract 3 序言 5 1 多糖类药物研究进展 5 1.1 多糖类药物的分类 5 1.2 多糖类药物研究的方向 6 1.3 多糖类药物的工业化 6 2 岩藻聚糖硫酸酯研究概况 7 2.1 化学组成和结构研究 7 2.2 提取、纯化及降解研究 8 2.3 生物活性及构效关系研究 10 3 本研究的目的和意义 13 第一章 岩藻聚糖硫酸酯的制备 15 1.1 材料与仪器 15 1.1.1 原料 15 1.1.2 试剂 15 1.1.3 仪器设备 15 1.2 试验方法 16 1.2.1 提取工艺路线的筛选 16 1.2.2 碱解工艺条件的考察 17 1.2.3 酶解工艺条件的考察 18 1.2.4 除蛋白（等电点法）条件考察 18 1.2.5 岩藻聚糖硫酸酯纯化工艺 19 1.3 试验结果与讨论 19 1.3.1 提取工艺的筛选 19 1.3.2 碱解工艺的确定 21 1.3.3 酶解工艺的确定 23 1.3.4 除蛋白工艺的确定 25 1.3.5 岩藻聚糖硫酸酯提取纯化 26 1.4 小结 26 第二章 低分子量岩藻聚糖硫酸酯的制备 27 2.1 材料与仪器 27 2.1.1 原料 27 2.1.2 试剂 27 2.1.3 仪器设备 27 2.2 试验方法 28 2.2.1 自由基氧化降解法制备低分子量岩藻聚糖硫酸酯 28 2.2.2 酸降解法制备低分子量岩藻聚糖硫酸酯 28 2.3 试验结果与讨论 29 2.3.1 自由基氧化降解法制备低分子量岩藻聚糖硫酸酯 29 2.3.2 酸降解法制备低分子量岩藻聚糖硫酸酯 30 2.4 小结 31 第三章 岩藻聚糖硫酸酯及其降解产物的抗凝血的生物活性研究 32 3.1 材料与仪器 32 3.1.1 样品 32 3.1.2 试剂及工具药 32 3.1.3 仪器 32 3.1.4 实验动物 33 3.2 实验方法 33 3.2.1 试剂配制 33 3.2.2 实验方法的建立 33 3.2.3 样品对正常家兔血浆凝血功能的影响 34 3.3 结果与讨论 34 3.3.1 实验方法的建立 34 3.3.2 样品对正常家兔血浆凝血功能的影响 35 3.4 小结 37 第四章 岩藻聚糖硫酸酯及其降解产物的质量控制研究 38 4.1 材料与仪器 38 4.1.1 原料 38 4.1.2 试剂 38 4.1.3 仪器设备 38 4.2 试验方法 39 4.2.1 单糖组成分分析 39 4.2.2 分子量和分子量分布的测定 40 4.2.3 岩藻糖含量的测定 40 4.2.4 硫酸酯基含量的测定 43 4.3 试验结果与讨论 44 4.3.1 单糖组成分分析 44 4.3.2 分子量及分子量分布 45 4.3.3 岩藻糖的含量测定 45 4.3.4 硫酸酯基含量的测定 49 4.4 小结 51 结 论 53 参考文献 55 攻读学位期间发表的论文 61 致 谢 62 梅花参岩藻聚糖硫酸酯的提取制备工艺及质量控制研究 摘 要 本论文从来源于我国南海、资源丰富、价格适中的海参品种梅花参的体壁中提取 分离纯化得到了一种岩藻聚糖硫酸酯，确定了其最佳制备工艺；采用金属离子催化的 氧化降解法和酸降解法制备得到一系列梅花参岩藻聚糖硫酸酯降解产物，并对其进行 化学成分及含量分析和抗凝血活性的研究，为梅花参岩藻聚糖硫酸酯的质量标准的建 立提供基础，也为我国开发新型的海参抗凝血药物提供科学依据。 采用碱解和酶解反应相结合的方法对梅花参体壁进行处理得到游离多糖，经除蛋 白、沉淀、盐析分级、超滤等纯化手段制备得到梅花参岩藻聚糖硫酸酯（FUC）。碱 解-酶解联用的方法优于碱解、酶解和酶解-碱解等工艺路线。正交试验筛选出了碱解 工艺条件和酶处理工艺条件。等电点沉淀法可以有效去除蛋白质。最终确定提取纯化 岩藻聚糖硫酸酯的最佳工艺为：40±2 °C 条件下用 8 倍量（v/w）的 0.5 M NaOH 碱解 3 小时；按照药材投量加入木瓜蛋白酶 0.5%（w/w），50±2 °C 搅拌酶解 6 h，反应液 pH 值为 6.5，经碱解-酶解的处理后的提取液，调节 pH 值至 2.5，4℃静置不超过 4 h， 离心（4000 rpm ??30 min）去沉淀，调节溶液 pH 值至中性，上清液经过三步醇沉-盐 析，超滤，冷冻干燥，即得到梅花参岩藻聚糖硫酸酯（FUC）。 采用金属离子催化的氧化降解法和酸降解法制备得到 10 个梅花参岩藻聚糖硫酸 酯降解产物（dFU