慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌细胞BKca通道对膜电位影响及意义-外科学(泌尿外)专业毕业论文.docxVIP

安徽 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 6.不足和展望……………………………………………………………27 参考文献…………………………………………………………………28 附录………………………………………………………………………33 致谢………………………………………………………………………36 综述………………………………………………………………………37 中英文缩略词表(Abbreviation) 英文缩写英文全称中文全称 PSMCs Prostate Smooth Muscle Cells 前列腺平滑肌细胞 CP Chronic Prostatitis 慢性前列腺炎 CPPS Chronic Pelvic Pain Syndromes 慢性盆腔疼痛综合症 SMC Smooth Muscle Cells 平滑肌细胞 LSCM Laser Confocal Microscopy 激光共聚焦显微镜 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 α-SMA α-Smooth Muscle Actin α-平滑肌肌动蛋白 DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 PBS Phosphate Buffer Saline 磷酸盐缓冲液 EPS Expressed Prostatic Secretions 前列腺按摩液 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 TRP Transient Receptor Potential 瞬时受体电位 VOCC Voltage-Operated Calcium Channel 电压操纵性钙通道 TNF Tumor Necrosis Factor 肿瘤坏死因子 IL-1 Interleukin-1 白细胞介素-1 CAP Chronic Abacterial Prostatitis 慢性非细菌性前列腺炎 CBP BKca Chronic Bacterial Prostatitis Big-ConductanceCa-ActivatedK+Channels 慢性细菌性前列腺炎 大电导钙激活钾离子通道 RCK Regulator of Conductance for Potassium K+电压门控的调节区域 ROC Receptor-Operated Channel 受体操纵性通道 慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌细胞 BKca 通 道对膜电位影响及意义 中文摘要 目的：探讨慢性非细菌性前列腺炎（Chronic Abacterial Prostatitis,CAP）SD 大鼠模 型炎症组与正常对照组前列腺平滑肌细胞（Prostate Smooth Muscle Cells,PSMCs） 大电导钙激活钾离子通道(Big-conductance Ca2+-activated K+Channels, BKca)对细胞 膜电位影响及其在 CAP 中的意义。 方法：随机将40只SPF级2月龄雄性SD大鼠分为慢性非细菌性前列腺炎模型组和正 常对照组（以下分别简称炎症组和对照组）。炎症组大鼠行去势手术，一周后观察 大鼠手术切口愈合良好，皮下注射17β-雌二醇0.25mg/kg，对照组每只大鼠皮下注 射生理盐水0.6ml，均为每日1次，连续注射30d后，CO2吸入法处死大鼠，无菌条 件下迅速取出前列腺组织置入含双抗的DMEM培养液中，小心剔除前列腺包膜及 周围脂肪、血管等其他组织，获得较为纯净的前列腺组织一分为二，一部分用于 细胞培养，另一部分组织经HE染色、石蜡包埋切片后光镜观察。体外组织块贴壁 法培养并纯化PSMCs，运用免疫组化SP法证实培养出的细胞为平滑肌细胞。PSMCs 经膜电位敏感的荧光染料DiBAC4 孵育后在激光共聚焦显微镜（Laser Confocal Microscopy,LSCM）下动态定量观察激活BKca通道所引起的膜电位变化。 结果：炎症组和对照组均于体外成功培养出前列腺平滑肌细胞，光镜下呈梭形或 多边形，核大居中，传代纯化后呈条梭状排列，符合平滑肌细胞组织学特征，经 免疫组化染色示 α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth Muscle Actin,α-SMA）阳性。炎症 组前列腺组织经 HE 染色镜下见腺管管腔及周围间质大量炎性细胞浸润等典型的 炎症反应表现，对照组无明显炎症表现。激活 BKca 通道后炎症组与对照组 PSMCs 细胞膜均发生超极化，两组效应均能被 BKca 通道特异性阻滞剂 Iberiotoxin (IbTX) 阻断而减弱。但炎症组超极化幅度明显减低，两组细胞超极化效应引起的 DIBAC4 荧光强度变化值分别为 18.78±2.92, 38.85±7.10(P0.05，n=20)，经 Ib