补肾调经汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450表达及雄激素影响的实验研究.docVIP

前言 前言 多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是一种生殖功能障碍与 糖代谢异常并存的内分泌紊乱性疾病，其主要的病理特征为持续不排卵和高雄激 素血症。临床上多表现为月经稀发或闭经、不孕、肥胖和多毛等，远期可以并发 心血管疾病、糖尿病、子宫内膜癌等 [1]。目前 PCOS 患者就诊率在不断增多，发病 率在生育期妇女高达 5％～10％，占无排卵性不孕症的 90％[2]。本病的发生有年 轻化趋势，严重困扰着生育龄妇女的身心健康，但其病因临床尚无定论[3]。 现代西医对于PCOS患者的治疗，调节内分泌多选用达英-35等口服避孕药， 调节胰岛素抵抗常用二甲双胍，对于有生育要求的患者，首选克罗米芬，以及相 关的辅助生育技术、手术治疗如腹腔镜下卵巢打孔术、卵巢楔形切除术等措施专 注于调节内分泌和促排卵，存在副作用大，复发率高，远期疗效不佳，术后粘连， 成功率低等不足，故临床效果欠佳，应用受限。中医古籍无本病病名记载，但根 据其症状多可归属于“月经后期”、“闭经”、“崩漏”、“不孕”、“癥瘕”范畴[4]。 近年来众多学者认为肾虚是其基本病因，《素问·上古天真论》言：“女子七岁， 肾气盛，齿更发长；二七天癸至，任脉通，太冲脉盛，月事以时下，故有子”[5]， 即说明女性发育到一定年龄，肾气充盛之时，天癸出现，促使女性月经初潮、周 期建立，出现排卵从而可以妊娠。但是，在临床上发现单纯肾虚患者较少，而以 复合兼夹证候多见，诸如血瘀、痰湿、肝郁和痰瘀互结等[6]。中医药在治疗这些 疾病有着传统的优势。近几年的文献报道中中医药对本病的治疗主要从辨证分型 论治、专方治疗、中药人工周期治疗、针灸及中西医结合治疗等，治疗方法多种 多样，临床疗效也较理想。但是，其作用机理尚不清楚。所以，揭示中医药治疗 多囊卵巢综合征的作用机理，是今后需要解决的一个重要问题。 有研究表明，在PCOS患者中卵泡睾酮(T)／雌二醇(E2)值升高，提示其芳香 化作用的缺陷[7-9]。细胞色素P450芳香化酶（Cytochrome P450Aromatase，CYP450） 是一种含高铁血红素的蛋白，与甾体激素的代谢密切相关，能催化CYP19雄激素 转化为雌激素，是雌激素合成的关键酶之一。其调节机制异常被认为是PCOS患者 排卵障碍和雄激素过多的重要原因之一 [10]。现阶段就PCOS患者P450芳香化酶蛋白 表达方面的研究，国内外的文献报道都比较少，尤其是国内就更少了。在PCOS的 中药治疗中，其对CYP450酶系影响的研究日趋重要。 本课题依据中医基本理论，结合导师临床治疗经验及现代医学理论，并借助 5 补肾调经汤对 PCOS大鼠卵巢颗粒细胞 CYP450表达及雄激素影响的实验研究 现代科学方法，通过动物实验，建立PCOS大鼠动物模型，将补肾调经汤对其进行 干预，在观察卵巢形态学变化的基础上，进一步采用免疫组化法检测补肾调经汤 干预后的PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白的表达，放免法检测雄激素变化， 以期发现中药治疗PCOS的作用机理和作用靶点，为中药治疗PCOS的有效性提供 客观依据和理论依据。 6 材料与方法 材料与方法 1 实验材料 实验动物 选用 SPF 级雌性大鼠 70只，体重为 260±20g。专人饲养。动物和饲料由河南 省实验动物中心提供，许可证号 sckx(豫)2010-0002。 饲料 一级大鼠标准全营养饲料，由河南省实验动物中心提供，规格：40kg/袋， 合格证：河南省实验动物管委会医动字第 0002686 号。 实验用药 （1）补肾调经汤由紫石英、仙灵脾、仙茅、肉苁蓉、熟地黄、山茱萸、丹参、 三棱、莪术、当归、穿山甲、香附、泽兰等组成。每副含生药 185g，由河南省中 医药研究院中药制剂室制成流浸膏，2g 生药/ml，消毒后置于 4℃冰箱保存备用， 使用时配成适当浓度。 （2）HCG 针 2000u/支，丽 珠 集 团 丽 珠 制 药 厂 ， 批 准 文 号 ： 国 药 准 字 产品批号：110305。 （3）诺和灵 30R，诺和诺德（中国）制药有限公司，批准文号：国药准字 产品批号：A110106529。 （4）达 英 -35,拜耳医药保健有限公司广州分公司，批 准 文 号 ： 国 药 准 字 产品批号 （5） 生理盐水，250ml/瓶，山东华鲁制药有限公司；5%葡萄糖注射液 250ml/ 瓶，山东华鲁制药有限公司。 （6）水合氯醛，上海化学试剂制药厂，批号： 主要实验试剂 （1）细胞色素 P450 免疫组化试剂盒：购于京中杉生物工程公司，批号： （2）睾 酮（T）放免试剂盒：上海劲