近红外光谱技术定量分析连作滁菊土壤中的阿魏酸含量.docVIP

近红外光谱技术定量分析连作滁菊土壤中的阿魏酸含 摘要应用近红外光谱(NIRS)技术定量分析连作滁菊土壤样品中阿 魏酸的含量。通过标准杠杆值、学生残差和马氏距离判断异常光谱，经 二阶导数和Norris平滑滤噪预处理后，在6000-4000 cm Symbolm@@ 1范围，最佳因子数为7,采用偏最小二乘法(PLS)构 建数学模型。结果表明，模型校止集和验证集与高效液相色谱仪(IIPLC) 测定的参考值Z间均呈现良好相关关系，校正相关系数Rc为0. 9914,交 叉验证相关系数Rev为0. 9935,校正集误差均方根(RMSEC)为0. 484, 预测误差均方根(RMSEP)为0. 539,交叉验证误差均方根(RMSECV)为 0.615。研究结果表明，NIRS分析技术能够实现连作土壤中阿魏酸的快速 检测，结果准确可靠。 关键词近红外光谱；连作土壤；滁菊；酚酸；阿魏酸 1引言 滁菊(Chrysanthemum morifolium cv. Chuju)是国家地理标志 产品，也是安徽省的特色植物资源。因其含有黄酮类、多糖、多酚类等物 质，具有良好的药物和食补功能，被国家卫生部批准为药食两用食物［1］。 滁菊的种植已有两千多年的栽培丿刃史，但是近年来滁菊种植出现了连作障 碍现象，已经成为滁菊产业发展的制约瓶颈［2］。 研究发现，由滁菊根系分泌和残体腐解产生的酚酸类物质大量分布在 连作土壤中，其产牛的自毒作用是滁菊连作障碍问题的重要原因之一［3］。 产生自毒作用的酚酸类物质种类很多，其中阿魏酸是一种广泛分布的酚 酸，同样也常见于英它中草药连作种植土壤中［4?6］。阿魏酸在连作滁菊 土壤中的含量相对较高，达到18.24 ug/g［3］,是所有检测到的酚酸物质 屮含量较高的一类，这使得阿魏酸成为滁菊酚酸类口毒物质的标志性物 质。因此，对于阿魏酸的快速检测，成为以滁菊为代表的中草药种植过程 中提前预防连作障碍问题发生的关键技术。 目前，阿魏酸的检测方法主要有高效液相色谱法［3］、反相高效液相 色谱法［7］、流动注射化学发光法［8］等。这些方法通常存在前处理复杂、 分析时间较长、样品容易污染等缺点。阿魏酸稳定性差，容易分解，使 得上述检测手段无法满足实际牛产过程的定量分析要求。 近红外光谱（NIRS）技术是近年来快速发展的绿色、无损分析技术， 具有无需样品预处理、？o二次化学污染、操作简便、快速的特点［4, 9］, 已广泛用于农业［10?12］、烟草［13］、食品［1］、药物［5］等行业的成分定 量测定。目前，釆用NIRS定量分析中草药土壤屮阿魏酸的文献尚未见报 道。本研究采用近红外光谱分析技术，应用偏最小二乘法构建数学模型， 预测连作滁菊土壤样品中阿魏酸的含量，为以滁菊为代表的中草药连作 障碍问题的早期发现与预防提供新技术。 2实验部分 2. 1仪器与试剂 Antaris II傅里叶变换近红外光谱仪（美国Thermo公司），配液体透 射检测器，采样系统以及TQ Analyst处理软件；Waters 6002487高效液 相色谱仪（美国Waters公司）；MS204电子天平、FE30 pH计（梅特勒托 利公司）；AB5150B超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；D101 大孔树脂（国药集团化学试剂有限公司）；阿魏酸（分析纯，Sigma公司）; 乙月青（色谱纯，德国Fisher公司）；其余试剂均为国产分析纯试剂。实 验用水为超纯水（18.2 MQ cm2）o 2. 2实验方法 2. 2.1样品的制备取连作5年滁菊土壤样品，加入20倍量95%乙醇， 加热回流提取2 h,提取3次，冷却，0. 45 um微孔滤膜过滤3次，合 并提取液，旋转蒸发至无乙醇味，收集浓缩液，再加入3倍量45°C温水， 室温静置24 h,以4500 r/min离心20 min,上清液储存于棕色瓶屮，4°C 冷藏备用。D101大孔树脂先用95%乙醇浸泡过夜，用超纯水反复冲洗直至 无乙醇味；再用4% NaOH浸泡6 h,用超纯水冲洗至中性；然后用4% HC1 溶液浸泡过夜，用超纯水冲洗至中性,装柱（200 mmX50 mm）备用。提 取液用50%乙醇以20 mL/h的速度洗脱，洗脱过程中每隔一段时间收集大 孔树脂富集纯化后的样品，5根树脂柱子平行操作，每根收集30个样品， 共得到150个样甜。 2. 2. 2阿魏酸的测定阿魏酸的测定方法参考木课题组关于酚酸的分析 方法[3],略做调整。具体HPLC测定条件如下：Symmetry C18色谱柱（250 mmX 4. 6 mm, 5 um）,柱温 30°C,检测波长 280 nm；流动相为 0. 01% H3P04 溶液（A）和乙月青（B）,以冰醋酸调节至pH 2.8,梯度洗脱：0?10 min, 95% A； 10?25 mi