JAP-182 HPLC 兽药等同时检测方法Ⅰ（畜、水产品）.pdf

HPLC 兽药等同时检测方法Ⅰ（畜、水产品） 1．分析目标化合物 参照附表。 2．仪器设备 带多波长检测器的高效液相色谱仪（HPLC-DAD）或荧光检测器的高效液相色谱仪 （HPLC-FL）或液相色谱—质谱仪（LC/MS）。 3．试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 乙腈：液相色谱用； 水：液相色谱用； 兽药等标准品：标明各兽药等的纯度。 4．试验溶液制备方法 称取5.00g样品，加入30 mL乙腈，20 mL 乙腈饱和正己烷和10ｇ无水硫酸钠， 搅 拌均匀后，以毎分钟3,000转离心分离5分钟，收集有机层。从收集的有机层中分 取乙腈层，将残余的正己烷层加入分离的残留物中，再加入20 mL乙腈，激烈振 荡后，以毎分钟3,000转离心分离5分钟，舍弃正己烷层，合并所得的乙腈层，加 入10 mL正丙醇，40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入1.0 mL乙腈：水（4： 6）混合溶液溶解，层叠0.5 mL乙腈饱和正己烷，以毎分钟3,000转离心分离，乙 腈-水层作为试验溶液。 5．制作标准曲线 各兽药等的标准品分别配成甲醇溶液，再配制成含各兽药等在适当浓度范围 的数个乙腈：水（4：6）混合溶液。分别注入 10μL 于 HPLC 中，用峰高法或 峰面积法制成标准曲线。 6．定量 注入 10μL 试验溶液于 HPLC 中，根据5的标准曲线，求得各兽药等的含量。 7．确证试验 用 LC/MS 或 LC/MS/MS 确证。 8．测定条件 柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径3μm），内径3.0 mm、长150 mm 柱温：40℃ 流动相：乙腈：0.05%三氟乙酸混合溶液从（1：99）到（1：0）的浓度梯度运行 35分钟，在（1：0）保持5分钟。用LC/MS的 ESI(-)测定时，用0.1%甲酸替换0.05% 三氟乙酸。 定测条件：参照附表 9．定量限 参照附表 10．注意事項 1）检测方法概述 本方法用乙腈从样品提取各兽药等，用正己烷除去脂性及脂溶性杂质和用无 水硫酸钠除去水及水溶性杂质后，PHLC-DAD、PHLC-FL 或 LC/MS 测定。 2）注意点 ① 附表是将适用本方法的化合物按照五十音符的顺序表示的。规定的品种中， 如有不适用本方法的代谢物等的化合物时，应注意。 ② 本试验方法不能保证能同时分析附表中所列的全部化合物。因化合物间的相 序 测定波长 测定离子 定量限 号 日文名 英文名 中文名 nm m/z mg/kg 互作用而分解等和干扰测定等原因，预先将测定的化合物合并成组，并有必要验 证这些点。 ③发生空气氧化、光分解的兽药等，全部操作在避光下迅速进行。 ④标准品溶于甲醇时，以少量N,N-二甲基甲酰胺溶解，甲醇稀释。 ⑤浓缩、完全除去溶剂的操作，用氮气气流平稳进行。 ⑥据 LC/MS 或 LC/MS/MS 的灵敏度，用HPLC流动相稀释试验溶液。 由于有在甲醇溶液中特别不稳定的农药等，试验溶液制备后迅速测定。制作标准 曲线的溶液用时配制。试验溶液不能在常温的自动进样器盘中长时间放置。 ⑦为了按照绝对标准曲线得到一定的准确度和精密度，要修正时采用稳定同位素 内标法、标准添加法。 ⑧ 定量限因使用的器械、试验溶液的浓缩倍数和试验溶液注入量而异，必要时 研究最适合的条件。 11．参考文献 １）村山三徳ら，食衛誌，32，155-160（1991） ２）厚生劳动省监修「食品卫生检查指针（兽药・饲料添加剂编）」p.26-43， （社）日本食品卫生协会（2003） 12．类型 C