麦氏安瘿蜂体内侵染Wolbachia的WO噬菌体的检测及其orf7基因序列分析.docVIP

麦氏安瘗蜂体内侵染Wolbachia的W0噬菌体的检测及其orf7基因序列分析 摘要：Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细 菌，能对宿主的繁殖模式进行调控，包括诱导胞质不 亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。W0噬菌体是 一类侵染节肢动物体内Wolbachia的细菌病毒。为检 测麦氏安瘗蜂Wolbachia是否被W0噬菌体侵染，本 研究使用W0噬菌体的orf7基因引物，对信阳、六安 及长沙3种群的W0噬菌体进行了 PCR检测。结果显 示，3种群的雌、雄虫体内的Wolbachia均有W0噬菌 体的侵染，感染率为100%o获得的3种群麦氏安瘻蜂 Wolbachia的W0噬菌体orf7基因序列均为371bp,序 列完全一致。其序列与粉斑螟Ephestia cautella的 wECau B3-1 和 wCauA5-l 株系、反瓠茧蜂 Asobara tabida 的wAtabA3-3株系的一致性最高，在NJ和ML系统树 中，均聚合在同一分支，属于W0噬菌体的第III大群。 关键词：麦氏安瘻蜂；Wolbachia； W0噬菌体； orf7基因；系统发育关系 中图分类号：Q968 文献标识码：A 文章编号：1007-7847 (2014) 03-0227-05 沃尔巴克氏体Wolbachia是一类母系遗传的细胞 质共生菌，属于原核生物界细菌门，变形菌纲的a亚 纲，立克次氏体目，立克次氏体科，Wol-bachia族, Wolbachia属⑴。先前基于单一基因序列，将Wolbachia 分为 A、B、C、D、E、F、G 和 H8 个群(group) [2], 最近也用多位点分型对其加以了验证⑶。研究得较多 的是A、B大群和C、D大群，前者主要感染节肢动物 [4],后者主要感染丝状线虫⑸。估计超过17%的节肢 动物、几乎全部的丝状线虫都感染了 Wolbachia[6?8]。 Wolbachia能导致多种的宿主表现型，即在线虫类中表 现为互利共生，而在节肢动物中则表现为对宿主生殖 的调控。Wol-bachia对节肢动物宿主的生殖调控包括: 诱导宿主胞质不亲和(cytoplasmic incompatibility, Cl) [9]、孤雌生殖(parthenogenesis induction, PI) [10] 雌性化(feminization of genetic males) [II]及雄性致死 (malekilling, MK) [12]o 此外，还发现 Wolbachia 对 某些膜翅目昆虫的卵巢成熟有促进作用[13]o但也有 一些Wolbachia种群并不导致宿主的生殖异常[14]o 20世纪70年代末在Culex pipiens体内检测到W0 类似元件的存在[15], Masui等首次在Teleo-gryllus taiwanemma感染的Wolbachia中发现了 W0噬菌体 [16]o经噬菌体衣壳蛋白orf7基因的PCR检测，发现 超过89%的节肢动物Wolbachia感染了 W0噬菌体 [17.18]o由于现在广泛使用的。卄7基因的引物还不是 足够的保守，不能扩增所有的W0噬菌体类型，所以 W0噬菌体的实际侵染率可能更高。如利用orf7基因 的PCR扩增,仅发现Wolbachia wRi株系的单一 W0 噬菌体感染[18],但对其全基因测序则发现共含3种 噬菌体片段[19]o另一方面，在丝状线虫的Wolbachia 种群中尚未检测到W0噬菌体的感染[18]o二十面体 结构的W0噬菌体粒子已经在一些感染Wolbachia的 节肢动物中成功纯化，通过透射电镜观察，可以发现 W0噬菌体头部的尺寸约为20?40nm,偶尔可见具备 类似于T2噬菌体的蛋白质尾部[20, 21]o最新的研究 表明，W0噬菌体染色体为环状，其复制类型类似于 入噬菌体[22] o i前，将W0噬菌体分为W0-A和W0-B 两种类型[23]o利用现有orf7基因引物，仅能扩增到 WO-B,基于其基因序列，可将W0-B划分为3个大群 (group) [17]o 瘻蜂科为瘻蜂总科(Cynipoidea)中的植食性类群, 一般于为害部位形成虫瘻，已知约1400种，可划分为 两个亚科，即古瘻蜂亚科Hodiernocynip-lnae和瘻蜂亚 科Cynipinae,瘻蜂亚科包含6个族，即栋瘗蜂族 Cynipini 客瘗蜂族 Synergini 豆瘻蜂族 Eschatocerin 蔷薇瘻蜂族Diplolepidini、械瘻蜂族Pediaspidili及草瘻 蜂族Aylacinj［24, 25］。已证实草瘗蜂族、蔷薇瘗蜂族、 栋瘻蜂族和客瘻蜂族的部分种类有Wolbachia的感染 ［26?29］。麦氏安瘻蜂Andricus mairei Kieffer属于瘻蜂 亚科瘻