蓝太阳鱼生长激素全长cDNA的克隆、表达分析及其转基因研究-生理学专业毕业论文.docxVIP

蓝太耀鱼生长激豢全致eDNA瓣竞建、表达分错艇菇转基因研究同时对脊椎渤物的GH分子进行了系统进化分析。 蓝太耀鱼生长激豢全致eDNA瓣竞建、表达分错艇菇转基因研究 同时对脊椎渤物的GH分子进行了系统进化分析。 2。应羽半定量RT-PCR方法，系统建疆究了GH基黧在鱼类菱傣 外组织中的表达情况。对蓝太阳鱼幼鱼和成鱼的12个组织中GHmRNA 的表达情况进行了检测，结果表明，除了垂体外，在其它许多组织如 腿疼、洼骧、鳃、。§驻、麓、弩等逸存在羞G馘mRNA靛广泛表达， 假表达水平比垂体要低，同时观察到在幼鱼和成鱼的性腺组织存在整 较高水平的液达。由此提示，蓝太阳鱼GH以旁分泌或臼分泌的方式 鼹夔太麓受躺生长繁臻发育起重要鼹终爱。 3． 应用细胞组织举方法对菔太阳鱼的胚胎和仔鱼的发育进行了 观察，结果表明，水温在25+1℃时，从受精到孵化期只需约30小时， 扶鼹凭麓到摄食鬟为4天左右，魄大多数淡承焦类数艇耱发弯要炔。 此外，发现经过脱膜处理或低温(6-8℃)处璁(时间不麓过2h)的受 精卵的发育并没有受到影响。同时应用组织切片技术对蘸太阳鱼的饿 艨发育霹露逑牙了磅突。结果发瑷，在三月龄蛙，雌雄藏太阳鱼发努 副第1I期，在四月龄时，雌雄都发育到第1ll期，在5-6月龄时，发静 到第1v期，在7—8月龄时，达到性成熟第V期。过冬时，雌鱼退化到 麓ll期，露攘鱼锈每整在第V麓。鞲巢帮卵巢发育都为不懑步型，且 精巢发育陇卵巢稍快。作者从生熊和生长的荧系上对蘸太阳鱼生长缓 慢的原因进行了探讨。 4。 暴热显徽注射法将掇告基鞭GFP基霪等入蕴太潮鱼受精赛中， 研究了外源基因在鱼类胚胎发育过程中整合与表达的时痔。结桑表明 GFP在原肠末期开始袭达，一直到鱼苗期并来出现表达鬣的衰减，并 袋瑷为嵌会经表这稳缌织特异蛙袋达。终源麓因在受钵审鹣表达率与 罄因构型和注射剂量衬美，环形质粒的表达瑟略高于线形质粒，较蕊 注射剂量的外源基因的表达率比低剂量的要商。同时将GFP基因与“全 篷”基因黧缀子进{亍了共转移，搽讨嚣静独立豹羚源基缀在蓝太掰镄 中整合或表达行为的关系，结果袭明两种独立的基因在受体中的整合 成表达没前必然的联系。 5。 逶避蓉嚣重缀，婚石斑惫生长激素慧爨缡码穿梦lj克隆至l鳃夔 Ⅱ 曹运长中山大学博士学位论文 曹运长中山大学博士学位论文 2004年5月 B-actin基因启动子下游，构建了“全鱼”生长激素基因表达载体 pCAecGHc。通过显微注射将重组基因CAecGHc导入了蓝太阳鱼受精 卵中，研制了转基因蓝太阳鱼。经过PCR、Southern杂交、斑点杂交、 RT-PCR等技术对转植基因在转基因蓝太阳鱼中的整合和表达情况进 行了检测，结果表明，转植基因CAecGHc在原代转基因蓝太阳鱼中的 整合率为5．60％一12．26％，并在转基因鱼中得到了正确表达，表达表现 为嵌合性。同时对转基因蓝太阳鱼的生长表型效应进行了对照养殖实 验，初步显示生产的转基因蓝太阳鱼具有较快的生长速度，比对照组 生长速度快20％一40％左右。 6． 应用近交策略培育出了两个转CAecGHc基因蓝太阳鱼Fl代品 系，采用PCR技术、Southern杂交技术对转基因Fl代品系的整合情况 进行了检测，转植基因CAecGHc在两个品系的整合率分别为22．03％ 和40．8％。结果表明转植基因通过生殖链传递给了子代，同时也证实外 源基因在转基因Po代的生殖腺中呈嵌合性整合。 综上所述，本文首次克隆了蓝太阳鱼生长激素全长cDNA，首次系 统的研究并发现蓝太阳鱼垂体的外周组织广泛地存在着GH mRNA的 表达，从生殖与生长的关系上初步探讨了蓝太阳鱼生长缓慢和个体较 小的原因，构建了“全鱼”基因表达载体，并应用转基因技术，成功 生产出了具有快速生长效应的转基因蓝太阳鱼，并得到了转基因子代 鱼。本文的研究结果为研究小型鱼类的生殖生长规律提供了很好的资 料，为小型鱼类的转基因研究奠定了基础。 关键词：蓝太阳鱼，生长激素，生长，繁殖，全鱼基因，转基因鱼 Ⅲ ————————————!垩茎生坐奎堂蔓主丝堕茎!竺!!!旦Cloning ————————————!垩茎生坐奎堂蔓主丝堕茎!竺!!!旦 Cloning and mRNA Expression Analysis of Full Length Growth Hormone cDNA from Green Sunfish，Lepomis cyanellus and Its Transgenic Study Major：Physiology Doctoral candidate：Cao Yun-chang Supervisor：Professor Lin Hao—ran(Academician) ABSTRACT Green sunfi