冷冻保存对富血小板纤维蛋的影响-口腔医学；口腔临床医学专业毕业论文.docxVIP

天津医科人学硕十学位论文中文摘要 天津医科人学硕十学位论文 中文摘要 目的： 本研究的目的是通过观察超低温冷冻保存(。196℃)前后富血小板纤维蛋白 (PRF)的超微结构和免疫组化结果，从而分析此方法对PRF组织形态和生物 学特性的影响，同时探讨超低温冷冻保存PRF存临床上应用的可行性。 方法： 本研究为富血小板纤维蛋白(PRF)的随机观察性试验，分为两部分，第，一 部分抽取健康志愿者刖’静脉血，均分为两份，标记，制取PRF，将对照组PRF放 入4％多聚甲醛固定；将实验组PRF放入盛有3ml终浓度为5％的二甲基亚砜 (DMSO)[拘冻存管(5m1)中，室温渗透25rain，4。C保存30rain，然后移入超低 一80。C温冰箱保存24 h，再置入液氮(．196℃)当中保存，保存一周后取出冻存管， 在38℃水浴中摇晃解冻3min，用预热无菌PBS液清洗2．--．3次后分别放入4％ 多聚甲醛固定。将两标本分别进行大体、光镜、透射电镜观察。并对二者的组 织结构进行比较和分析。 第二部分办抽取健康志愿者肘静脉血，相同方法制耳义两PRF标本，放入相 』、迈固定液r|=i，flj JJ作绸．织切片，进行免疫组化检测，观察冷冻6，J．后生长因子及免 疫因子的染色情况，并对结果进行分析比较。 结果： 第一部分实验肉眼观察冷冻l训焉PRF均为：!}透明膜状结构，表面光滑，但 冻后标本弹性减弱；光镜一F观察冷冻胁后PRF纤维蛋白均从外而内网状结构I 11 密集变疏松，红染的纤维蛋白网内火量蠊染的臼绅l胞核敞在分布：冻前PRF透 射电镜下司‘观察到每个血．／J、板都与数条纤维蛋白有关联，多数血小板有各种纠I 胞器，膜完整，含有0【颗粒，走形与JfH．／j、板)J莫xxt、形一致的纤维蛋白和血小板外 膜之问13有密度稍高物质存在，部分与纤维蛋白紧密接触的血小板膜结构消失， 冻后PRF中大部分血小板外形不规则或有膜损伤，Ol颗粒明显减少，部分血小 板内部结构完全消失。走形与血小板膜外形一致的纤维蛋白和血小板外膜之问 有密度稍高物质依然存在，纤维蛋白结构无明显变化。 第二部分通过免疫组化检测，观察冷冻前后PRF中血小板源性生长因子 (PDGF)，转化生长因子131(TGF．B1)，白细胞介素．1，4(IL．1，4)，肿瘤坏 死因子(TNF)均有阳性反应表达，IL．1、IL．4阳性反应部位主要分布于PRF 的纤维蛋白网状结构中，PDGF|jI=_他l!i反应部位：j!要成点状分和于纤维网状结构 的纤维蛋白网状结构中，PDGF|jI=_他l!i反应部位：j!要成点状分和于纤维网状结构 中，TGF．131阳性反应部位主要位H兰1细胞的细胞核和细胞质，TNF阳性反应部 位主要位于白细胞的细胞质。其中PDGF、TGF．|3l、IL．1、TNF表达差异无统训1 学意义(P0．05)，冻后PRF中IL．4表达高于新鲜PRF，差异有统计学意义(P 0．05)。 结论： 1 HE染色组织切片和透射电镜均证实冻后PRF的主要结构依然是纤维蛋白形成 的疏松多孔的网络结构，它仍具有诱导细胞迁移和细胞增殖，从而加速组织愈 合过程的功能。 2透射电镜结构提示冻后PRF血小板发生冻融，0【颗粒明显减少，其释放再释 放生长因子能力减弱。 3免疫组化结果显示冻存后PRF中依然有生长因子的表达，并且含量差异无统 计学意义。表明其依然捌有促进骨再生和软组织愈合的生物学基础。 4 HE染色结果提示冻后PRF中依然含有大量未激活的白细胞，免疫组化结果提 示冻后PRF中依然存在生物活性因子的阳性表达，表明其仍然存在抗感染作用 的生物学基础。 5由于冻后PRF出现弹性减弱，』I!IL小板冻融等现象，因此，对于富血小板纤维 蛋白的冷冻保存的研究，尚需进 一步的动物实验以及临床病例观察。 关键词：寓j_『|1一小板纤维蛋白： 冷冻保存： 超微结构： 生长因子；免疫因二f Abstract Abstract Objective： The aim of this study was to investigate the effects of cryopreservation on the morphology and bioactive factors of platelet—rich fibrin(PRF)through the uItra structure and immunohistochemistry results．At the same time explore the feasibil ity of Cryopreservation PRF’S clinical application． Methods： This report is a randomized ob