利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建-果树学专业毕业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权二：媾学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权二：媾 学位论文 否 如需保密，解密时问 年 月 闷 是否保密 独创性声明 IIYMIl3JJlIIIoIIIM5IIIl2IM6IIIHoII Jl型 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特另l加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 雨使矮过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一豫工作的同志对本研究所做的任 俺贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：暖愁葱 时闻：州年多月，多日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，’ 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人筏意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务．同对 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文)在解密后适用于本授权书。 鞭獬糙名堙稳 新躲钾。荔∥ 签名ij期：沙够年5月，多西 签名日期：≯护／辞 厂月／∥曰 万方数据 利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建目录 利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建 目录 摘要 ．．i Abstract ．iii 缩略词表 ．v Abbreviations ．．、， 第一章前言 1 1．课题的提出 ．1 2．植物无融合生殖现象 ．2 3．柑橘珠心胚研究进展 ．3 4．激光显微切割研究进展 ．4 4．1激光显微切割技术发展和原理 4 4．2 Leica AS LMD 7000的特点 5 4．3激光显微切割技术结合组织切片技术 6 4．4激光显微切割技术在植物研究中的应用 6 4．4．1植物生殖与胚胎研究 ．．7 4．4．2基因表达分析 ．．7 5．课题的目的与意义 ．8 第二章激光显微切割材料选择 9 1．引言 ．9 2．材料与方法 lO 2．1材料及其来源 一10 2．2实验方法 一10 2．2．1 ‘伏令夏’橙果实石蜡切片方法 10 2．2．2 ‘伏令夏’橙果实冰冻切片方法 10 2．2．3不同柑橘多胚材料果实石蜡切片方法 11 2．2．4多胚柑橘种子采集及种子中胚数目统计 11 3．结果与分析 11 3．1伏令夏橙珠心胚起始发生过程观察及切割时期确定 ．．1 1 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文3．2适合柑橘珠心胚激光显微切割的切片方法选择 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 3．2适合柑橘珠心胚激光显微切割的切片方法选择 一12 3．3适合柑橘珠心胚激光显微切割的多胚材料筛选 ．．13 3．4激光显微切割所需样品量估计 ．．14 3．5不同柑橘多胚材料种子中胚数目统计 一15 4．讨论 ．．1(； 4．1多胚柑橘材料胚珠中NEI细胞数量及出现时间、位置 ．．16 4．2影响激光显微切割NEI细胞材料筛选的因素 一17 第三章激光显微切割技术体系构建 ．18 1．引言 18 2．材料与方法 1 8 2．1实验材料 ．．1 8 2．2石蜡切片方法 ．．19 2．2．1石蜡切片的一般步骤 19 2．2．2适合柑橘果实的石蜡切片方法 19 2．3激光显微切割方法 一20 2．3．1开启Leica AS LMD系统 ．20 2．3．2激光切割仪器校准 20 2．3．3激光显微切割参数调试 2l 2．3．4载玻片扫描 2l 2．3．5勾画目标细胞 22 2．3．6收集管准备 22 2．3．7正式切割及图像数据收集 22 2．3．8取出收集管、关闭系统 23 2．4 RNA提取 ．．23 2．5 Agilent 2100 Bioanalyzer RNA检测 ．23 3．结果与分析 24 3．1石蜡切片的方法改进 ．．24 3．1．1切面选择 24 3．1．2切片厚度 24 3．1．3展片方法 24 万方数据 利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建3．1．4脱蜡方法 利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建 3．1．4脱蜡方法 25 3．2激光显微切割方法 一25 3．3 Aglient 2100 RNA质量检测结果 26 3．4影响RNA质量的因素 27 4．讨{念 ．．29 4．1石蜡切片过程对切割材料RNA质量的影响 29 4．2激光显微切