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MALD l-TOF技术在蛋白质组学中的应用 吕志祥(江苏省丹阳市人民医院212300) 【摘要】利用MALDI-TOF技术进行蛋白质组学研究是目前较为常见的研究方法, 具有灵敏度高、工作量小、时间少等优点。木文简要介绍了该技术这几年的发展 和应用。 【关键词】MALDI-TOF、蛋白质组学、质谱、肿瘤 【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752 (2013) 05-0093-02 利用质谱进行蛋白质组学研究是近年兴起的、较为有效的研究方法，特 别是对于发现潜在的生物标志物，用以鉴别健康与疾病具有重大意义［1-2］。基质 辅助激光解吸电离飞行时间(MADLI-TOF)质谱技术在用于发现牛.物标志物方面国 内外均有报道，他们与以往的双向电泳、多维液相色谱技术不一样，灵敏度更高， 工作量小，也更节省时间。关于这项技术最早的报道是鉴别癌症，例如对癌症的 鉴别括卵巢癌、前列腺癌、乳房癌和肺癌等，并且因为结果的高灵敏度和特异 度引起轰动。 一、 MALDI-TOF技术的发展 飞行时间质谱(TOF)作为质量分离器的一种在上世纪70年代以前就已提 出，具有结构简单，测定质量范围宽等特点，目前使用的TOF分为直线型和反射 型。将MALDI离子化技术和TOF质谱技术结合的MALDI-TOF质谱技术具有操作 简单，灵敏度高，质量分辨率高，测定质量范围宽等特点，非常适合生物分子和 高聚物的分子量测定，因此随着生命科学的发展，MALDI-TOF技术亦得到长足进 步。［4-6］ 二、 MALDI-TOF技术不同蛋白组学中的应用 对肿瘤癌细胞在分子水平进行诊断和治疗 在过去的十年之间，MALDI-TOF质谱分析已成为癌症研究的一个常用的 工具，虽多与蛋白质分析奋关仍单独阐述。这项技术的高吞吐量和相对简单的依 靠血清/血浆就能获得生物标志物的和进行验证对科研工作者十分有吸引力。利 用MALDI-TOF质谱进行血浆/血清分析，包括蛋白质芯片SELDI-TOF质谱分析， 血清磁珠纯化，质量光谱免疫分析已经制定了许多技术方法。以肾细胞癌症患者 为例，癌组织和周边的正常肾组织中存在差异表达的蛋白分子，就可以运用 MALDI-TOF质谱对差异表达的蛋白质标记点进行了鉴定，随后经过二维电泳分离 样本即可发现差异表达的蛋白质点。用MALDI-TOF还可以对这些点进行分析鉴定 以确定了他们的种类找出与细胞病变相关的关键蛋白。[8] Wilmet等人发现在乳腺癌细胞内，神经营养因子受体p75 (NTR)作为 一个促生存因子能够刺激细胞抗凋亡效应，但其作用机制仍然不完全明确。通过 调查全球范围内的数据，P75 (NTR)的过度表达会引起细胞内蛋白组发生修饰， 这种改变同促凋亡剂肿瘤坏死因子(TNF)相关。结果数据表明，P75 (NTR)的 过度表达诱导产生乳腺癌细胞蛋白质组的修改，并提供奋助于受体在肿瘤细胞内 抗凋亡的信息。 另一方面，利用MALDI-TOF质谱对乳腺癌进行蛋白组学调查发现分子中 存在异常的DNA甲基化使得肿瘤抑制基因(TSGs)和microDNA在自身抗癌活动 过程中保持沉默，因此可以再分子水平通过去甲基化治疗乳腺癌成为可能，冋吋 这种方法还能为其他的肿瘤治疗提供额外的途径。 在糖肽类分析中的应用 糖基化是一种普遍的蛋白质翻译后的修饰反应，在生命过程中起着重要 作用。糖蛋白上的寡糖链能够影响蛋白的稳定性及蛋白的构象，参与胞外胞内的 信号转导，并能引发与其它分子之间特异的相互作用。MADU-TOF质谱以其简单、 快速和较高的灵敏度己经成为糖结构分析中的重要手段。但是，由于寡糖的亲水 性强，缺乏易于结合质子的碱性基团，离子化效率较低，使得MALDI-TOF质谱对 寡糖链结构的分析远远落后于对蛋白/肽段的结构分析。为提高寡聚糖在质谱中 的检测灵敏度，研究者进行了各种尝试，主要通对寡糖的化学修饰来提高寡糖的 质谱检测灵敏度。 如在寡聚糖的还原端通过衍生化加上各种结构中含有质子的基团(如季铵碱和毗 啶)，或加上易得质子的基团(如胍基)；通过增强寡聚糖的疏水性来提高其检测灵 敏度，因为疏水性强的分析物更容易与基质形成均匀的混晶从而产生更强的信号, 如将苯胼、菇酪基团标记在寡聚糖的还原端从而提高寡聚糖在质谱中的检测灵敏 度。［9］ MALDI-TOF质谱在糖类中的应用常常和其他分析手段相结合，例如通过 免疫焚光检测DSA结合型糖蛋白在人正常肝细胞changrsquo;s liver中的表达和 定位。从人健康肝组织及肝癌组织中提取总蛋白，通过蔓陀萝凝集素(DSA)亲和 柱层析分离和浓集DSA结合型糖基化蛋白质，分别通过双向电泳、糖蛋白染色 复合总蛋白染色、基质辅助激光解吸飞行吋间串联质谱(MALDI-TOF-MS/ MS)技 术及通过二维色谱