卵巢癌耐药铜离子转运蛋白hCTR1相关miR-206的筛选与功能研究-妇产科学专业毕业论文.docxVIP

学 学 校 代 码 ： 10 246 学 号 ：092 112 50002 卵巢癌耐药铜 离子转运 蛋 白 hC T R l 相关 m iR -206 的筛选 与功 能研 究 院 系 ： 妇 产 科 医 院 专 业 ： 妇 产 科 学 姓 名 ： 程 煜 指 导 教 师 ： 鹿 欣 主任 医师 完 成 日 期 ： 20 12 年 3 月 15 曰 复 复 旦 大 学 硕 士 毕 业 论 文 英 文 缩 写 hCTR l human copp er tran spor ter 1 人 铜离子转运 蛋 白 1 m iRN A m icr o RN A 微 小 R N A 3 ’UTR 3 pr im e un tran sla ted r eg ion mRNA 3 ’端 非 编码 区域 DDP c isp la t in 顺 拍 c is- d ia m m in e d ich lor id o p la t in um F B S fe ta l b o v in e s er um 胎 牛 血 清 PB S p hosp ha te bu ffer sa lin e 憐 酸 盐缓 冲 液 TB S tr is- buf fer e d sa l ine Tr is 5粦酸 盐 缓 冲 液 MT T 3~ (4 , 5- D im e th y lt h ia zo l- 2 - y l) - 2 ，5_ d ip h e n y l t e t r a z o l iu m b r o m i d e 3 - (4 , 5- 二 甲基 噻 唑 - 2 )- 2 ， 5 - 二 苯 基 四 氮 唑 溴 盐 R e a l- t im e P C R r e a l- t im e q u a n t it a t iv e P o lym e r a s e c h a in r e a c t io n 实 时 荧 光 定量 PCR DMS O D im e th y l su lfox id e 二 甲基 亚讽 IC P -M S in du c t iv e ly co up le d p la sm a — m a ss sp e c tr om e tr y 电感 耦 合 等 离 子 质 谱 目 目 录 中 文 摘 要 1 英 文 摘 要 2 贿 3 主 要 材 料 6 施 6 结 果 16 舰 2 5 吉 30 ? 考 $ 献 3 5 在 读 研 究 生 期 间发 表 及 完 成 的论 文 37 尉 己 5 1 中文摘 中文摘 要 目的 ：筛选 铜 离子 转运 蛋 白 hC T R l 相关 的 m iR N A ，探讨此类 m iR N A 是 否通 过 铜 离 子 转 运 蛋 白 h C T R l 参 与 卵 巢 癌 顺 铂 耐 药 。 方法 ：通过 生物 信 息学数据库及 已发表 的文献 ，初步筛选 与 hC T R l 及 卵巢癌 铂类 耐 药相 关 的 m iR N A s; R eal T im e-P C R 和 W estern B lot 在 卵巢 癌 及 其 耐 药 细 胞 株 中 验 证 初 步筛选 m iR N A 与 hC T R l 表 达 的相 关 性 ；上 调 或下 调 初 步 筛 选 的 m iR N A ， 免 疫 荧 光 定位 ，流 式 细 胞 术 定 量 分 析 m iR N A 对 hC T R l 表 达 的调 控 作 用 ；通 过双 荧 光 素 酶 报 告 基 因验 证 h C T R l 的 3 ’U T R 中是 否 包 含 筛 选 m iR N A 的直 接 作 用位 点 ； 电感 耦合 等 离 子质 谱 法 （IC P -M S ) 测 定 m iR N A 表 达 与细 胞 内铂 含 量 的相关 性 。 结果 ：通 过检 索 发现 ，m iR -206 可 能与 卵巢癌 耐 药可 能相 关 ， 同时也与 hC T R l 的 3 U T R 中两 处序 列互 补 ；m iR -206 在 卵巢 癌 细胞 中与 hC T R l 基 因及 蛋 白表 达 呈 负 相 关 ；与其他 初 步筛 选 的 m iR N A 相 比，m iR -206 对 hC T R l 表 达 的调 控 最 为 明显 ； A 2780 卵 巢 癌 细 胞 中转 染 m iR -206 拟 似 物及 抑 制 物 发 现 ，m iR -2 06 表 达 水 平 影 响 hC T R l 基 因及 其 蛋 白的表 达 ；通 过 双 荧 光 素 酶 报 告基 因实验 发 现 ，m iR -206 能够 特 异 性 结 合 hC T R l 3 U